小体鲟血清Vg、Ca、性类固醇激素浓度变化与性腺发育关系

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fenjinzhu
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本课题对小体鲟(Acipenser ruthenus)血清卵黄蛋白原(vitellogenin,Vg)、钙离子(calcium,Ca2+)、性类固醇激素浓度变化与性腺发育关系进行研究。 实验一:采用组织匀浆、凝胶柱层析(SephadexG-200)、SDS聚丙烯凝胶电泳和免疫扩散等方法,对小体鲟卵进行纯化分析并制备多克隆抗体。结果显示纯化后得到的卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)有三个亚基组成,分子量分别是74.3kDa、37.6kDa和33.6kDa;制备的豚鼠抗小体鲟Lv和兔抗小体鲟Lv抗血清,测得效价均达到1:64以上。 实验二:建立双抗体夹心酶联免疫吸附反应(ELISA)方法检测小体鲟雌鱼亲鱼繁殖周期内卵黄蛋白原浓度的变化。结果表明,该方法的检测灵敏度为9.8ng/mL,批内变异系数为4.802%,批间变异系数为6.067%,工作范围为39~2500ng/mL,在该范围内,标准曲线具有良好的线性和重复性。小体鲟生殖周期内血清卵黄蛋白原的只出现一个浓度高峰期,即每年四月中旬其血清中卵黄白原的浓度达到最大值242.2±17.15μg/mL,随后下降至次年八月78.28±5.40μg/mL,进入下一个繁殖期。 实验三:采用ELISA方法和分光光度计法测定了不同年龄小体鲟血清Vg和Ca2+含量,并研究了血清中Vg和Ca2+的浓度变化与其性腺发育的关系。结果表明:卵巢发育过程中,血清中Vg与Ca2+含量具有相关性;卵黄生成朔,血清中Vg浓度和Ca2+浓度相关,R2=0.9264;在卵黄生成前期和卵黄沉积初期血清中Vg的含量较低,随卵母细胞内卵黄的沉积,血清中的Vg和钙离子的含量升高;卵母细胞由卵黄沉积初期的0.56mm增大到卵黄生成术期的2.01mm,对应时期的血清Vg浓度由110.65μg/mL上升到242.22μg/mL,血清Ca2+浓度出2.34mol/L增大到2.72mol/L;研究表明血清中Vg和Ca2+含量可以鉴别出卵黄生成时期的小体鲟性别。 实验四:采用放射免疫方法测得养殖小体鲟(4~5龄)血清中雌二醇(estradiol-17β,E2)、睾酮(testosterone,T)的周年浓度变化。结果显示,小体鲟的血清E2浓度从八月开始持续升高到次年三月,达到13.74ng/ml,四月略有下降达到12.32ng/ml,产卵前达到最大(16.2ng/ml,p<0.01),产卵后急剧下降(8.5ng/ml,p<0.01)。T全年都比较大并且呈现波动变化,变化范围为8.6~42.7ng/ml,平均值为22.1ng/ml。E2和T都在产卵前达到最大值,在产卵后下降。血清性类固醇激素的季节变化和性腺发育时期的变化基本一致。
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