论文部分内容阅读
无机砷是自然环境中普遍存在的一种人类确认致癌物。人群长期暴露于低剂量无机砷中，可导致皮肤癌、肺癌、肝癌、肾癌、膀胱癌和前列腺癌的患病危险性显著增加。然而，砷化物与大多数致癌物不同，它不是特异的致突变剂，它不能诱发基因的点突变和DNA损伤，如DNA链断裂、交联和DNA加合物形成；但细胞培养发现砷能诱发细胞形态转化、染色体畸变、姐妹染色单体互换和微核增加等。迄今为止，无机砷致癌的实验动物模型一直未能成功，其致癌的分子机制仍不清楚。近年人们试图运用分子生物学技术手段和砷化物的甲基化代谢途径进行砷的致癌机制的研究。 无机砷在甲基转移酶（MTase）的作用下，利用S-腺苷甲硫氨酸（SAM）提供甲基，在体内进行生物甲基转化作用，使无机砷变成有机砷。在通常情况下，真核细胞DNA甲基化一去甲基化修饰过程中，DNA甲基转移酶同样也需要SAM作为甲基供体。因此，砷的致癌性可能是由于砷化物干扰了体内DNA正常甲基化途径，从而影响DNA损伤修复、细胞周期调控以及细胞分化。DNA甲基化改变易导致基因突变和基因表达异常。大量研究表明，肿瘤组织中普遍存在着异常的DNA甲基化问题，特别是抑癌基因启动子区CpG岛高度甲基化，将产生基因沉默，而这种改变在一些肿瘤发生的早期就能见到。 为探讨砷暴露对p16抑癌基因甲基化模式和基因表达的影响，以及p16基因甲基化与地砷病发病的关系，我们研究分析了砷暴露后人支气管上皮细胞和内蒙地砷病病区人群血液样品的p16基因甲基化状况。本课题设计实施了如下两部分的研究。 第一部分采用甲基化特异性PCR（MS-PCR）及RT-PCR等技术，观察分析了两种无机砷（NaAsO2和Na3AsO4）对人支气管上皮BEP2D细胞系p16基因甲基化及表达的影响。结果表明：NaAsO2（0.016～2μmol／L）和高浓度Na3AsO4（80和160μmol／L）均可引起BEP2D细胞p16基因启动子区长度为150bp核苷酸片段中的CpG岛发生甲基化；而低浓度Na3AsO4（20和40μmol／L）不能使BEP2D