高通量转化高粱cDNA文库改良水稻

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水稻产量关乎到世界粮食安全,而且提高水稻产量是科学研究的热点。随着水稻基因组DNA的测序完成,更多的水稻农艺性状相关的功能基因被鉴定了,而这些被克隆的水稻农艺性状相关的基因多被应用于传统的水稻育种工作中。高粱、玉米和小麦都是禾本科中的谷类作物,携带着许多非常有价值的基因,可以用其改良水稻。为了探索高粱中有用的基因,我们构建了一个高粱cDNA过表达文库,并对水稻进行高通量的转化,以期望获得一些产量高的、抗病强的、能适应极端环境的等有价值的水稻转基因系。本研究利用构建好的高质量的高粱cDNA过表达文库转化水稻,创建了上千株水稻突变体。在高粱cDNA过表达文库被应用于转化以前,我们对其进行了质量评价,37个cDNA中有20个cDNA具有和NCBI数据库里一致的CDS,另外16个也具有ORF,这说明文库的质量符合要求;同时,通过同源比对,我们也发现了5个高粱新基因。转基因获得1229株TO代水稻转基因系,性状涉及株高、分蘖、叶型、叶色、叶夹角、穗型和粒型等,我们对这些性状进行世代的观察和相关数据收集,结果是92.2%的叶长发生了变化,58.3%的叶宽有差异,48.6%的抽穗期有变化,近91.5%的株高变矮和83.9%的有效穗有明显不同:通过对所有转基因系的性状考察,转基因过程确实影响了水稻的株高和育性;针对稳定遗传的转基因系比如叶夹角、穗子大小、粒型(和淀粉合成)等,我们可以设计实验方案进行下一步的研究。对0752株系的基因Sb01g013740进行克隆并重新转化水稻,我们证明了此基因过表达能够使水稻种子变小,而对于该基因是否与水稻株高和穗型相关,这需要进一步的分析。由于产量性状也是我们关注的焦点,所以我们就对92个株系进行了考种分析,结果是获得了19个产量增加的株系,并克隆了14个基因,而这些基因有13个具有和NCBI数据库里一致的CDS,其中7个CDS和高粱抗逆性有关,这暗示我们这些基因很可能通过增强水稻的适应性来提高水稻产量。本研究是对利用cDNA过表达文库创建水稻功能获得性突变体的一种尝试,事实证明,此方法是可行的、有效的。
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