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大肠杆菌是造成新生仔猪腹泻(Neonatal diarrhea,ND)重要的病原体。为了弄清我国部分养猪地区致新生腹泻大肠杆菌的生物学特性,我们从江苏、江西、辽宁、福建、安徽、山东、浙江、河南、广东和上海等10个省市临诊上疑似新生仔猪腹泻的直肠棉拭及病死猪的十二指肠和肠系膜淋巴结作病料分离到大肠杆菌1073株。通过玻板凝集和试管凝集试验,除270株未能定型、73株自凝外,测定出730个分离株的血清型,这些分离株覆盖了107个血清型,其中以O101、O107、O20、O149、O9、O93、O23、O8、O91、O1和O11等11个血清型为主,共419株,占定型菌株的57.4%,为我国部分地区致新生仔猪腹泻大肠杆菌的常见血清型,同时我国部分地区致仔猪腹泻大肠杆菌O血清型的多样性趋势也得到了证实。应用多重PCR方法对1073株大肠杆菌分离株四种毒素(STa、STb、LT、Stx-2e)基因进行检测,结果显示,携带毒素基因的大肠杆菌共有122株,毒素基因检出率达11.4%。4种毒素基因(STa、STb、LT、Stx-2e)分别检出24株、102株、39株和2株。其中包括七种毒素类型,以STb+、STb+LT+和STa+三种毒素类型为主,分别占毒素基因阳性菌株的48.4%(59/122)、30.3%(37/122)和15.6%(19/122)。应用兔回肠结扎试验和断奶仔猪小肠结扎试验对分离株的产肠毒素的能力进行检测,结果发现4株肠毒素基因检测阳性的分离株均具备产生一种或两种肠毒素的能力,而毒素基因阴性的大肠杆菌分离株不具备产肠毒素的能力,由此表明我们建立的多重PCR方法对大肠杆菌毒素基因的检测是可靠的,可用于大肠杆菌毒素类型的快速检测。根据本试验测定的毒素基因类型可将122株毒素基因阳性大肠杆菌分为ETEC、VTEC/ETEC和VTEC三类。其中ETEC检测出120株,占新生仔猪腹泻病例的98.4%(120/122),VTEC、VTEC/ETEC各检出1株,这些数据表明,ETEC是我国部分地区致新生仔猪腹泻的最重要的病原菌。本试验应用玻板凝集试验对1073株大肠杆菌分离株进行5种黏附素(F4、F5、F6、F18和F41)检测,结果表明:有152株大肠杆菌分离株表达一种或多种黏附素,检出率达14.2%(152/1073),5种黏附素(F4、F5、F6、F18和F41)分别检出55株、48株、45株、7株、47株,单独表达一种黏附素的有111株,表达两种或两种以上黏附素的有41株。本次试验共检测出十四种黏附素类型,其中以F4~+、F6~+、F5~+F41~+、F5~+和F41~+五种黏附素类型为主,分别检出44株、34株、21株、15株和13株。结合本试验对分离株O血清型的检测结果,分析O血清型与毒素类型和黏附素类型之间的相关性。结果表明:122株毒素基因阳性大肠杆菌分离株的主要血清型为O149、O107、O91、O93和O11等。其中STb~+大肠杆菌的血清型达24种,主要有:O107、O11、O98和O15等,O149主要见于(89.2%)STb~+LT~+大肠杆菌;152株表达黏附素的大肠杆菌分离株覆盖了37种O抗原型,前6种O血清型为O149、O107、O101、O11、O9和O93。毒素基因检测阳性同时表达黏附素的80株分离株表现出19种毒力因子组合形式,其中以STb~+LT~+/F4~+、STb~+/F5~+F41~+、STb~+/F4~+、STb~+/F5~+和STb~+/F6~+五种组合形式最常见,27株STb~+LT~+/F4~+大肠杆菌的O血清型全为O149,说明O149/STb~+LT~+/F4~+型大肠杆菌是我国致新生仔猪腹泻流行菌株。通过对所有1073个分离株毒力岛基因进行检测发现,16.4%(176/1073)的分离株irp2和fyuA基因扩增阳性。176株HPI~+大肠杆菌分离株覆盖31个血清型,前9种血清为O101、O23、O107、O91、O20、O8、O118、O11和O38。对1073个分离株的LEE(ler和eaeA)的PCR检测,2.7%(29/1073)的分离株ler和eaeA基因扩增阳性。10株ler、eaeA、irp2和fyuA基因扩增都为阳性,7株为O91,1株为O139,1株为O38,1株未定型。29株LEE~+分离株中有48.3%(14/29)的分离株STa~+检测阳性,但不表达黏附素;5株为O91,3株为O107,1株为O9,1株为O4,1株为O111,2株为未定型,1株自凝。以上结果表明:(1)LEE和HPI毒力岛在新生仔猪腹泻大肠杆菌中一定程度存在;(2)LEE~+、HPI~+以及LEE~+HPI~+大肠杆菌在致新生仔猪腹泻中的作用,还有待进一步研究。