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鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus，SVCV)为单股负链RNA病毒，可引起鲤发生大规模死亡，给渔业带来巨大经济损失。SVCV基因组编码5种结构蛋白，即核蛋白N(Nueleoprotein)、磷酸化蛋白P(Phosphoprotein)、基质蛋白M(Marxprotein)、糖蛋白G(Glycoprotein)和RNA聚合酶L(Polymerase)。其中核蛋白N是组成核衣壳结构的关键蛋白，且表达量最大，在病毒的基因转录及调控中具有重要作用。哺乳动物Viperin具有抗病毒功能，鱼类Viperin在抗病毒过程中也具有重要作用，但其潜在机制尚不清晰。本实验制备了SVCV核蛋白N的单克隆抗体，为探究SVCVN蛋白的功能及病毒检测提供了有效工具;同时围绕SVCV对Viperin及其剪接异构体有何影响，Viperin及其剪接异构体如何影响SVCV感染展开深入研究，以期从天然免疫的角度揭示Viperin的选择性剪接与SVCV的关系，为解析SVCV的免疫与致病机制、防控产品的开发提供科学依据。主要内容如下: 1.SVCV N单克隆抗体的制备 以含有SVCV N的质粒N-RFP为模板，扩增N基因(1254bp)，并将该基因连接至pGEX-KG载体，构建原核表达质粒。将重组蛋白在感受态BL21中诱导表达及纯化，并将其作为抗原免疫BALB/c小鼠，将血清中抗体效价较高的小鼠免疫B细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。通过ELISA方法检测，筛选出杂交瘤细胞并命名为N-2。将杂交瘤细胞注射至BALB/c小鼠腹腔内制备大量单抗。间接免疫荧光(IFA)和免疫印记(Western blot)实验结果表明，制备的抗体可特异性识别SVCVN蛋白，且该抗体识别的靶点位于SVCV N的第227～336位氨基酸之间。 2.Viperin及其剪接异构体抗SVCV功能研究 选择性剪接是真核基因转录后的修饰的过程，存在于大多数免疫相关基因中。本研究在感染了SVCV的胖头觞肌肉细胞系(Fathead minnow muscle cell，FHM)中发现了一种Viperin的剪接异构体，命名为Viperin_sv1。实验表明SVCV可以诱导Viperin及Viperin_sv1mRNA的产生，Poly(I∶C)对Viperin具有诱导作用但对Viperin_sv1无明显影响。通过IFA实验发现，Viperin及Viperin_sv1部分定位在线粒体，且两者在FHM细胞质中具有共定位的现象。Viperin在SVCV感染早期对病毒具有抑制作用，但随着病毒不断的复制，其抗SVCV作用显著减弱。Viperin_sv1在FHM细胞感染SVCV的不同时间均发挥抗病毒的功能。Viperin_sv1可显著诱导IFN及ISG分子(包括Mxb和PKR)的mRNA产生，而Viperin无此作用。进一步实验发现，Viperin_sv1可以显著诱导IFN上游的RIG-Ⅰ，IRF3及IRF7的产生，而对NF-κB无明显影响。这表明鱼类Viperin_sv1而非Viperin可通过IRF3/7通路激活IFN进而抑制SVCV的复制。尽管SVCV可诱导Viperin_sv1mRNA表达，但可以下调其蛋白水平。蛋白酶抑制剂MG132可以保护SVCV引起的Viperin_sv1蛋白水平降解，且可以拯救Viperin_sv1的抗病毒功能。这表明SVCV可调控Viperin_sv1通过蛋白酶体途径降解进而抵消其部分抗病毒作用。