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腺病毒属中的家禽腺病毒分为众多的血清型,其中Ⅰ群的血清4型(Fowl Adenovirus Serotype 4,FAV-4)引发一种新流行的呈现急性死亡且全群传染的禽类疾病:心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium-hepatitis Syndrome,HHS)。临床症状表现为3~5周龄的家禽突然出现死亡,尤其多发于肉鸡品种,大体眼观病变可见出血性肝炎和心包积液,鉴于无明显的临床症状,预判该病就十分困难。安卡拉地区首先爆发HHS,随后,中国于2015年开始在多省市爆发且广泛流行,本实验室于2016年7月首次分离鉴定出天津地区FAV-4毒株TJ1607,随后选用1日龄雏鸡,利用TJ1607毒株构建了疾病模型。总结前人的经验,本试验制备了以纯化TJ1607毒株为抗原的弗氏佐剂灭活疫苗,继疫苗质量检验合格后,多次免疫高产蛋鸡,制备精制高免TJ1607 IgY和精制高免TJ1607 IgY脂质体,随后进行了IgY抗体的雏鸡保护试验,显示出一定的防治效果,同时建立了检测血清中TJ1607抗体的间接ELISA方法,具体试验内容如下:1.TJ1607弗氏佐剂灭活疫苗的制备。以增殖和纯化的TJ1607毒株为抗原,以弗氏佐剂为油乳剂,制备TJ1607弗氏佐剂灭活疫苗。疫苗经检验,滴水试验未见分散;无菌检验未见细菌生长;离心试验未见分层;动物试验显示接种健康雏鸡后无不良反应,综上表明所制备的疫苗可用于后续的试验研究。2.TJ1607 IgY抗体的制备。选用高产蛋鸡,将TJ1607弗氏佐剂灭活疫苗对其进行多次接种,第三次接种后的第17天抗体效价达到1:128且持续不变,此时收集鸡蛋,获得高效价的TJ1607卵黄抗体。对提纯条件进行优化,选用水稀释法、辛酸-硫酸铵沉淀法结合透析技术纯化TJ1607高免卵黄抗体,纯化后的IgY抗体效价不变但纯度更高,利用脂质体对其进行包裹,制备精制高免TJ1607 IgY和精制高免TJ1607 IgY脂质体。3.TJ1607血清抗体间接ELISA检测方法的建立。以纯化的TJ1607为抗原包被酶标板,TJ1607血清抗体为一抗,兔抗鸡辣根过氧化物酶为二抗,棋盘法筛选抗原、一抗及二抗的最佳稀释倍数,绘制阳性血清抗体浓度与OD值的标准曲线,计算拟合程度,重复性试验检验建立的检测方法。结果显示,TJ1607抗原的最佳包被浓度为350μg/mL,TJ1607血清抗体的最佳稀释度为1:3000,HRP-IgG(兔抗鸡)的最佳稀释度为1:2000;阳性血清抗体浓度与OD值线性关系良好,线性方程为y=21.751x-3.5781,R~2=0.9993;重复性试验显示板内变异系数为1.68%~4.88%,板间变异系数为4.03%~9.85%,可用于后续血清样品的检测。4.TJ1607 IgY的雏鸡保护试验。攻毒雏鸡保护试验结果表明精制高免TJ1607 IgY对天津地区HHS的治愈率为85%,预防保护率为100%,可有效的防治天津地区HHS的流行。抗体消长动态试验结果表明精制高免TJ1607 IgY与粗制高免TJ1607 IgY相比,吸收较好且产生抗体迅速,达到峰值时间较快,但缓释效果不如粗制IgY,可应用于紧急情况下的防疫和免疫时的多次接种。IgY抗体口服试验结果表明精制高免TJ1607 IgY原液口服无效,制备成精制高免TJ1607 IgY脂质体后,可用于口服免疫。