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目的:探讨应用TLR8配体CL075(thiazoloquinolinecompound)和Poly(dT)(thymidinehomopolymerphosphorothioateODN)刺激后,TLR8及其相关细胞因子IL-12、IL-10在小鼠DC2.4细胞中的表达情况;建立小鼠Lewis肺癌模型,观察TLR8配体对肿瘤生长的影响,并研究其调节抗肿瘤免疫应答的机制,为临床对肺癌的治疗提供新的思路和实验基础。
方法:(1)常规培养DC2.4细胞,光学显微镜观察未刺激组、Poly(dT)刺激组、CL075和Poly(dT)共同刺激组细胞的形态变化。(2)通过qRT-PCR测定DC2.4细胞hhTLR8、IL-12、IL-10的mRNA表达。(3)通过ELISA测定DC2.4细胞中IL-12、IL-10的蛋白表达。(4)通过Westernblot测定DC2.4细胞中TLR8的蛋白表达。(5)建立小鼠Lewis肺癌模型,观察经TLR8配体处理后肿瘤的发展进程。(6)取各实验组小鼠引流淋巴结及脾脏利用qRT-PCR法检测TLR8、IL-12、IL-10的mRNA表达水平。(7)采用流式细胞术检测小鼠体内DC细胞TLR8的表达、CD3+CD8+IFNу+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的变化情况。
结果:(1)未刺激及Poly(dT)刺激组细胞较幼稚,树突较短且少;CL075和Poly(dT)刺激组细胞活化,树突增多且伸长。(2)Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLR8、IL-12、IL-10的mRNA及蛋白表达量与阴性对照组相比均无统计学意义;CL075和Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLR8、IL-12的mRNA及蛋白表达量较阴性对照组明显升高(P＜0.05或P＜0.01),而IL-10的mRNA及蛋白表达量则明显低于阴性对照组(P＜0.01或P＜0.05)。(3)CL075和Poly(dT)能够有效地延缓Lewis肺癌小鼠体内肿瘤的进展,抑制肿瘤的生长。qRT-PCR及FCM检测结果显示,经CL075和Poly(dT)处理后,其局部引流淋巴结、脾脏中TLR8、IL-12的mRNA表达水平明显增加,而IL-10的mRNA表达水平下降;DC表面TLR8的表达、CD3+CD8+IFNу+T细胞的比例明显上升;淋巴结中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例明显下降,而脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例与对照组相比无明显差异。
结论:(1)应用TLR8配体后,TLR8、IL-12在小鼠DC2.4细胞中的表达水平明显升高,而IL-10的表达水平则明显降低。(2)TLR8配体能够明显延缓肿瘤的进展。其主要机制是通过上调DC表面TLR8的表达,进而促进CD3+CD8+IFNу+T细胞、IL-12的产生,抑制CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞、IL-10的产生,抑制肿瘤的生长。