羟基磷灰石纳米粒子负载阿霉素体外抗肝癌研究

来源 :武汉理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:show20090907
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纳米粒子由于其独特的纳米生物学效应已经引起了人们极大的研究兴趣。纳米技术是推动当今医学发展的主要动力之一,纳米粒子作为药物载体在抗肿瘤研究方面已经成为目前医学研究的热点。羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HAP)纳米粒子不仅具有优良的生物相容性和抑癌活性,同时也是理想的基因和药物载体。然而,其在抗肿瘤药物的携带和治疗癌症的研究还不多见。本课题选用均相沉淀法制备的1.4 mg/mLHAP纳米粒子,采用振荡培养使HAP纳米粒子吸附阿霉素(adriamycin,ADM),使用紫外分光光度法测试并分析其吸附量,结果显示:HAP纳米粒子对5μg/mL浓度的阿霉素吸附量最大,每克羟基磷灰石吸附阿霉素的质量为284.2679mg。采用原子力显微镜观察其形貌及吸附程度,结果显示:HAP纳米粒子吸附1~5μg/mL阿霉素的效果比较好。将HAP纳米粒子负载阿霉素(5μg/mL)与Bel-7402肝癌细胞、L-02肝细胞作用,采用光学显微镜观察各组细胞的形态、数目和贴壁情况,结果表明HAP纳米粒子负载阿霉素后与对照组(5μg/mL阿霉素)相比,Bel-7402肝癌细胞形态发生变化要小,且对正常L-02肝细胞的毒性要低。采用MTT法检测HAP纳米粒子负载阿霉素对Bel-7402肝癌细胞的生长抑制率情况和对正常L-02肝细胞的毒性影响,结果显示:1.4mg/mL HAP纳米粒子负载5μg/mL阿霉素与Bel-7402肝癌细胞作用第5天其生长抑制率高达92.90±1.25%,而单独应用1.4mg/mL HAP纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞生长抑制率为15.86±4.52%,5μg/mL阿霉素对Bel-7402肝癌细胞生长抑制率为81.33±1.74%,与两药单用相比HAP纳米粒子负载5μg/mL的阿霉素的生长抑制率明显增强。HAP纳米粒子负载5μg/mL的阿霉素与L-02肝细胞作用第3天开始,其细胞毒性明显比单用5μg/mL阿霉素的毒性降低,细胞毒性级别由3级降到2级;作用5d细胞毒性级别由4级降到2级。采用四环素和Eu掺杂分别标记HAP纳米粒子与Bel-7402肝癌细胞作用,使用荧光显微镜观察,结果表明2%Eu掺杂HAP纳米粒子的荧光强度效果较佳。采用共聚焦激光显微镜动态观察HAP纳米粒子负载阿霉素与Bel-7402肝癌细胞作用的过程及分布状况。分析表明2%Eu标记的HAP纳米粒子主要进入细胞质,HAP纳米粒子负载阿霉素主要进入细胞核及细胞膜周围,确定HAP纳米粒子负载阿霉素使用荧光材料Eu掺杂标记的最佳浓度为2%(g/mL)及与细胞结合的时间约为2h左右,主要进入细胞核及细胞膜周围为主,少部分进入细胞质中。综上所述,HAP纳米粒子是一种良好的药物载体,负载阿霉素后可以达到减毒增效的效果,为HAP纳米粒子负载阿霉素的进一步应用提供相关的理论依据,对HAP纳米粒子负载阿霉素的深入研究使其有望成为抗肝癌的新一代治疗药物。
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