膀胱癌在我国泌尿外科肿瘤中，无论其发病率和死亡率均占首位。膀胱癌 至今病因不明，早期诊断疗效较好，手术切除是主要治疗方法，但容易复发。因 此从基因水平研究膀胱癌的发生发展机理，并选择膀胱癌特异性基因进行基因治 疗已成为这一领域的研究热点。 研究表明，膀胱癌的发生发展是一个非常复杂的过程，涉及成千上万的基 因改变。正常基因的突变或缺失、癌基因的异常扩增和表达以及多个基因的协同 作用、基因本身的多效性和机体免疫因素，决定肿瘤表型的表达与否。目前认为 癌基因异常激活和抑癌基因表达抑制是最根本的原因。大量研究证实膀胱癌的发 生发展与P53、Ras、Rb、erbB-2、myc、EGF、P16等基因密切相关，但至今尚无 一种基因可确切地解释膀胱癌的病理过程。随着人类基因组计划(Human Genome Project，HGP)的逐步完成，现己确定在基因表达调控、机体兔疫及细胞分化等 重要生命过程中有许多相关基因是成簇排列的，它们可以分布在一较大的染色质 区域或不同染色体上，在基因表达调控方面具有明显不同于单个基因的特性，其 中的各个基因是作为统一的整体进行调节，各基因在细胞分化、个体发育过程中 保持高度的时空以及表达量的协调性。在膀胱癌发生发展的复杂过程中，很可能 存在着这样相互协调的共表达的基因群体。对各个环节和阶段中共同表达的众多 基因作为一个整体进行研究，筛选出膀胱癌发生发展过程的多个环节上起作用的 分子和起关键性调控作用的基因，揭示其基因水平的本质，对于诊断和基因治疗 将具有重要意义。基因芯片技术可同时对大量组织的基因表达水平进行全面地量 化检测，从而达到高效筛选差异表达基因的目的，为研究肿瘤发生发展中的基因 开关及表达程度提供了强有力的工具。基因表达谱芯片在肿瘤研究领域中具有非 常重要的价值。 人类基因组计划是当今生命科学领域内的头号工程，其主要目的是测定人类 基因组 DNA 3×109核苷酸的序列，并确定全部的70,000至100,000个基因。人 类基因组序列的测定即将完成，但基因的鉴定及功能阐明仍然是一个巨大的挑 2 ， 战。全长CDNA的克隆和测序将直接导致基因的发现，并有助于基因功能的研究。 富含全长CDNA的高质量CDNA文库的构建对于全长CDNA克隆至关重要。从 本实验室构建的高质量CDNA文库中，通过高效差减杂交及大规模CDNA测序， 筛选到一批全长新基因，部分新基因已登录到GenBank。 将从cDNA文库中克隆到的部分新基因和己知功能基因制备成基因芯片，运 用基因芯片对正常人膀肌粘膜和膀耽移行上皮细胞癌（ransitional cell carol。ma， TCC，以下简称为膀肤癌）组织以及膀眈癌细胞株EJ的基因表达差异进行了研 究。将人正常膀耽组织rnRNA和膀眈癌mRNA逆转录荧光标记合成cDNA荧光 探针后，同时与基因芯片杂交，并重复两次。每次结果均通过扫描，定量，采用 扫描成像计算机系统进行分析，计算荧光信号的差异程度，筛选出共同的差异表”达基因。 按阳性标准，从12800个基因中筛选出差异表达基因854条（7％），膀眯癌 组织中198条表达上调，656条表达下调；如果按差异显著的标准，则共筛选出 差异显著基因384条，占3乃％，其中膀耽癌组织中87条表达增加，297条表达 降低。有259条（67．4％）基因已在GenBank登录。这些在不同病例的组织标本 中表达变化一致的基因主要涉及细胞增殖、凋亡、细胞周期等多个过程，其中表 达增加的基因包括：（）与信号传递有关基因（如酪氨酸激酶相关基因、G蛋白 类、胞内激酶、第H信使相关基因等），（2）细胞周期相关基因（细胞周期素等）， （3）肿瘤转移相关基因（如整合素、基质金属蛋白酶等），（4）凋亡抑制基因， （5）DNA结合蛋白、转录起始因子等，（6）线粒体相关蛋白。表达降低的基因 包括：（）凋亡相关基因，（2）信号传递基因（如酪氨酸磷酸酶等），（3）粘附 分子相关基因（如纤粘连蛋白、层粘连蛋白等），（4）TGF－B相关基因，（5）抑 癌基因乃 Rb等人 “）细胞骨架蛋白、锌指蛋白等。除上述己知基因外，实 验还检测到与膀恍癌相关的许多末知基因，本实验