Toll样受体2和Toll样受体4在小鼠变应性鼻炎中的表达

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目的变应性鼻炎是一种吸入变应原而导致的以鼻黏膜嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞等多种炎性细胞浸润,IgE介导的免疫细胞释放化学介质引起的Ⅰ型变态反应炎症性疾病,以鼻痒、打喷嚏、流清涕等为主要症状,可并发哮喘、鼻-鼻窦炎和分泌性中耳炎等疾病,严重影响患者生活质量。近年来对变应性鼻炎的研究虽然有了很大进展,但对其发病机制仍需要进一步的研究。Toll样受体(TLRs)是近年发现的介导天然免疫反应的关键受体,它们识别特定的病原相关分子模式并启动了一系列防御反应。由于TLR2和TLR4的配体已经涵盖了自然界绝大多数对人体致病的微生物类别,因此,二者在人Toll样受体家族中最为重要。以前的研究已经证实TLR2和炎症因子之间的协同促进表达在炎症中的重要意义。目前,对于TLRs在变应性鼻炎中的表达及作用机制的研究报道少见,且存在争议。国内报道TLRs在鼻息肉中有高表达,也有国外报道没有发现TLRs在鼻息肉组较健康对照组有高表达,但在变应性鼻炎的急性期发现高表达。由此可见,对TLRs在变应性鼻炎中表达的研究有重要意义。方法1、变应性鼻炎模型制备Bal b/c小鼠以卵清白蛋白(OVA)100μg加氢氧化铝(Al(OH)3)2mg溶于0.1ml的生理盐水中腹腔注射,分别在1、3、5、7、9、11、13、15天各一次,共8次,然后于第16天起每侧鼻腔用10μg卵清白蛋白滴鼻激发,连续11天,建立小鼠变应性鼻炎模型。2、变应性鼻炎模型评价(1)末次滴鼻激发后观察30分钟,观察小鼠打喷嚏,挠鼻,抓脸,鼻溢等症状并进行计分;(2)抽取致敏动物血,血清中加入标记荧光生物素的变应原,然后在450nm处测定光密度值,来判定血清中IgE的效价;(3)各组小鼠模型行常规HE染色,并行高倍镜下嗜酸性粒细胞计数。3、应用免疫组织化学染色技术在蛋白水平对变应性鼻炎的Toll样受体2、4的表达进行研究。4、统计结果均以均数±标准差表示,多组均数间比较用OneWay-ANOVA分析。均用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果1、成功的制备出小鼠变应性鼻炎的模型。2、变应性鼻炎组小鼠的症状评分与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);变应性鼻炎组小鼠IgE效价与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);变应性鼻炎组小鼠的嗜酸性粒细胞计数与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。3、免疫组化法发现TLR2和TLR4在正常小鼠鼻黏膜细胞的胞浆和胞核无阳性或极弱阳性染色;在变应性鼻炎组小鼠鼻黏膜细胞胞核和/或胞浆呈不同程度的褐色或黄棕色阳性染色。4、变应性鼻炎组小鼠在30min时鼻黏膜细胞上TLR2表达开始增多,但与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05),2h时鼻黏膜细胞上TLR2表达明显增加(P<0.01),12h时鼻黏膜细胞上TLR2表达开始下降(P<0.05)。24h时鼻黏膜细胞上TLR2表达与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。5、变应性鼻炎组小鼠在30min时鼻黏膜细胞上TLR4表达开始增多,与正常对照组差异有统计学意义(P<0.05),2h时鼻黏膜细胞上TLR4表达明显增加(P<0.01),12h时鼻黏膜上TLR4表达开始下降(P<0.05)。24h时鼻黏膜细胞上TLR4表达正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论1、TLR2和TLR4在变应性鼻炎组中均有表达。2、TLR2和TLR4在变应性鼻炎的急性期出现高表达,在变应性鼻炎的整个病程中呈现动态变化。
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