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南京中医药大学第一附属医院血液科独创的复方制剂“血复康”以清热解毒活血之法治疗慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)及急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)高白细胞血症均取得较好临床疗效,近年来沈群教授课题组对血复康治疗CML在细胞和分子水平的作用机制方面进行了较为深入的研究,证明了血复康可呈现浓度-时间依赖性抑制K-562细胞(CML红白变细胞株)的增殖,并促进其凋亡,在此过程中伴有CML特有的BCR/ABL致病融合基因表达的下调；对血复康各组分处理K-562细胞的初步研究亦表明：青黛、莪术及葛根单药有效成分均能以不同途径诱导K-562细胞凋亡。本课题在既往研究工作取得良好结果的基础上,进一步以不同浓度葛根总黄酮(Puerariae radix flavones, PRF)处理Kasumi-1、HL-60、NB4和U937 4种AML细胞株不同时段后,观察PRF对4种AML细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期变化,结果发现：50～200μg/ml浓度范围内PRF对4种AML细胞株增殖抑制作用差异显著,强度依次为NB4细胞>Kasumi-1细胞>U937细胞>HL-60细胞；50μg/ml和200μg/ml PRF不同程度地改变NB4、Kasumi-1、U937及HL-60细胞周期进程,使G1期比例下降,S期比例增高,并出现亚二倍体峰,呈现浓度依赖性。提示葛根总黄酮体外对不同AML细胞株具有选择性增殖抑制作用,以NB4细胞最为明显,Kasumi-1细胞次之。课题组对PRF诱导NB4细胞凋亡相关机制的研究中已经证明：PRF诱导的NB4细胞凋亡与JNK信号通路活化,启动Caspase凋亡级联反应,下调PML-RARa融合基因表达密切相关。进一步以Kasumi-1细胞(AML1-ETO融合基因阳性,AML-M2细胞株)为研究对象：1.MTT法检测PRF在10～500μg/ml浓度范围内对Kasumi-1细胞均有增殖抑制作用,随着PRF浓度的增高及作用时间的延长,细胞活力下降。经统计分析,不同浓度组间比较差异有统计学意义(p<0.01),而不同时间组间比较,虽然随药物处理时间延长细胞增殖抑制率越高,但无统计学差异(p>0.05)。经SPSS软件Probit analysis分析,PRF处理Kasumi-1细胞48h, IC10、IC50、IC90的PRF浓度分别为：29.25μg/ml、158.07μg/ml、618.60μg/ml,进而选取与之相近的50μg/ml、200μg/ml、500μg/ml PRF为低、中、高剂量组处理Kasumi-1细胞。2.3组不同浓度PRF处理48h后进行Hoechst 33258染色观察,Kasumi-1细胞均表现出凋亡特征,500μg/ml PRF处理组最为明显；流式细胞术FITC-AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡,发现50μg/ml、200μg/ml、500μg/ml PRF均可促进Kasumi-1细胞凋亡,特别是早期凋亡率与浓度正相关；3. Western blot法检测凋亡相关蛋白,结果表明PRF可呈浓度依赖下调Bcl-2蛋白,上调Bim蛋白的表达,活化凋亡相关蛋白Caspase9和Caspase3; 4. RT-PCR检测证明,50～500μg/ml浓度范围内PRF在mRNA水平对t(8；21)特定的致病融合基因AML1-ETO的表达并无明显影响。上述结果提示一定浓度PRF诱导Kasumi-1细胞凋亡的效应与下调凋亡相关抑制因子,激活Caspase9和Caspase3凋亡级联反应有关,与AML1-ETO致病靶基因无关。