目的1.了解BDNF高亲和性受体TrkB与低亲和性受体p75NTR于hASCs表达情况。2.明确不同浓度的BDNF对hASCs增殖及细胞周期相关基因影响。3.分析不同浓度的BDNF对hASCs ALP活性及成骨分化相关基因影响,探讨BDNF在hASCs成骨分化过程中的作用。方法1.以胶原酶消化分离hASCs,贴壁培养并传代纯化。对hASCs进行流式细胞术检测,诱导成脂、成骨分化,并进行染色,以对间充质干细胞特性进行鉴定。2.以免疫荧光双染法检测TrkB受体与p75NTR受体于hASCs表达情况。3.以含不同浓度BDNF的无血清培养基培育hASCs,分别于12h.24h.48h以MTT法检测hASCs增殖能力变化,并于48h时收集细胞,real-t ime PCR检测c-myc、ki-67表达水平。4.以含不同浓度BDNF的成骨诱导培养基培育hASCs,于成骨诱导14d时检测hASCs的ALP活性变化,并于成骨诱导3d、7d、14d时收集细胞,real-time PCR检测成骨标志基因Runx2、ALP、OCN表达水平。结果1.hASCs表达间充质干细胞表面标志,不表达造血干细胞表面标志,在体外经诱导可向成脂、成骨方向分化。2.检测结果发现hASCs表达TrkB受体,但未见明显p75NTR受体表达。3.BDNF可促进hASCs增殖,上调c-myc、ki-67表达,具有浓度依赖性(尸<0.05)。4.随BDNF浓度增高,ALP活性呈下降趋势,以100ng/ml组抑制效果最显著(P<0.05)。成骨7d时,ALP随浓度增加出现下降趋势；成骨14d时,Runx2、ALP、OCN均随处理浓度增加出现下降,于100ng/ml组下降最显著(P<0.05)。结论采用酶消法与贴壁筛选法纯化细胞可有效分离hASCs；高浓度BDNF可促进hASCs增殖但抑制其向成骨分化。