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目的探讨盐霉素是否具有抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡的作用,并从分子水平研究盐霉素对Hela细胞生长可能的调控机制方法(1)将培养后的人宫颈癌Hela细胞以每孔5000个细胞浓度种入双96孔板,培养24小时后,分别随机选取12孔,其中一组为空白对照组,余九组加入盐霉素,浓度分别为0、0.375、1.5、6、12、24、48、96、120μg/m L,其中0μg/m L组为阴性对照组,通过酶标仪测出药物作用24h、48h、72h的OD值,绘制出抑制率与盐霉素浓度和作用时间的关系图;(2)根据上述结果,筛选出细胞接近IC50的盐霉素浓度,分别为6、12、24μg/m L三组,同上法设对照组,将2ml细胞浓度为5×105/ml的细胞接种于6孔板上,培养24h以后,分别向各孔加入浓度为0、6、12、24μg/m L盐霉素,24h后收集细胞,离心固定,PI染色,流式细胞仪测出各组细胞的细胞周期和凋亡率;(3)同上分组法,将10ml细胞浓度为5×106/ml的细胞悬液分别加入到5块培养皿中,培养24h后,分别向各培养皿加入浓度为0、6、12、24μg/m L盐霉素,24h后提取各组细胞总蛋白,Western Blot法检测Bax、Bcl-2、caspase-3基因表达。结果(1)cck-8法检测发现,0.375-120μg/mL的浓度范围内的盐霉素作用Hela细胞24-72h后,细胞增殖抑制率由0.89%上升至96.35%,盐霉素对Hela细胞增殖的抑制作用与盐霉素浓度及作用时间呈正相关关系,差异有统计学意义(P<0.05);(2)流式细胞仪检测盐霉素干预24小时后的Hela细胞凋亡情况。发现Hela细胞凋亡率由(11.15±0.70)%上升至(45.1±0.21)%。且凋亡率随浓度增加而呈线性上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)流式细胞仪检测盐霉素干预24小时后的Hela细胞周期分布情况。发现当盐霉素浓度由6μg/m L升高为24μg/m L时,处于G0/G1期的细胞由(59.56±0.93)%升高至(74.31±0.57)%,且盐霉素浓度越高对G0/G1期的阻滞越明显,差异具有统计学意义(P<0.05),处于G2期和S期的变化无明显规律;(4)Western Blot法检测发现,药物组Bcl-2蛋白表达明显低于阴性对照组,且与浓度负相关,差异具有统计学意义(P<0.05),Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达明显高于阴性对照组,且与浓度呈正相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论(1)盐霉素对人宫颈癌细胞Hela的体外增殖有较强的抑制效应,且具有良好的浓度依赖性和时间依赖性;(2)盐霉素可诱导Hela细胞凋亡,其机制可能是通过增强bax、caspase-3基因的表达、减少bcl-2基因的表达。