太湖水华蓝藻中水溶性多糖的分离纯化

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太湖水华蓝藻主要由铜绿微囊藻、水华鱼腥藻和水华束丝藻等藻类组成,是太湖流域的夏季主要污染物之一。从水华蓝藻中提取多糖、蛋白质等生理活性物质,为治理提供了一条变废为宝、提高综合治理效益的新的有效途径。本论文以太湖水华蓝藻为对象,以其中的水溶性多糖为提取目标,系统研究了分离纯化过程,主要研究内容如下:1.采用盐酸水解的方法水解蓝藻,在水解液料比v(mL):m(g)为33:1、水和盐酸体积比v/v为10:1、水解温度100℃、水解时间为4 h的水解条件下,测得蓝藻(干重)中糖的总含量为10.79%。薄层层析分析结果表明,蓝藻水解产物中含有葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖或甘露糖等。2.分别考察热水浸提法和反复冻融法提取蓝藻中水溶性糖的条件。在提取率相近的情况下热水浸提法提取时间短、能耗小、操作简便。采用正交试验方法优化热水浸法提取蓝藻水溶性糖的提取工艺,得最佳工艺条件为:提取液料比v(mL):m(g)为30:1,提取温度80℃,提取时间4 h。此条件下,水溶性糖的提取率为56.24%。3.采用絮凝法处理水溶性多糖粗提取液,PAC、WCK、PFS能有效地去杂降粘,絮凝效果好。在PFS加入量为500 mg/L条件下,室温,体系粘度减少41.10%,杂质絮凝率、脱色率、蛋白质去除率和剩余总糖含量分别为80.32%、75.48%、50.30%和85.40%。絮凝时间、温度和溶液pH对絮凝效果影响不明显。经絮凝处理后的糖溶液体积浓缩10倍后,用3倍体积的乙醇沉淀,复溶液中多糖纯度为86.01%。其中含有3种多糖组分,平均相对分子量(Mp)分别为146万、43万和1767。Zeta电位研究表明,PFS具有中和杂质表面电荷、促进絮凝体团聚的作用。絮凝体形态研究表明,絮凝在5分钟内发生,通过絮凝处理可显著改善提取液的可处理性。4.静态吸附实验结果表明,树脂ADS-7吸附蛋白质等杂质能力强,多糖回收率高。pH值为6 h,5 mg/mL多糖溶液在温度为35℃条件下振荡吸附6h,蛋白质去除率、杂质去除率、多糖回收率和多糖纯度分别为74.29%、73.17%、91.90%和95.46%。以ADS-7为载体的层析分离实验表明,多糖浓度为5 mg/mL、pH值为6的多糖溶液,进样量16BV,以2BV/h的速度流过树脂时,收集液中蛋白质去除率、杂质去除率、多糖回收率和多糖纯度分别为85.01%、82.33%、98.10%和97.14%。经纯化后的溶液中含有2种糖组分,相对分子量(Mp)分别为144万、42万。
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