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烟草是我国重要的经济作物之一。近几年来,重庆烟区烟草黑胫病发病甚为严重,造成大量经济损失。在烟草病害的多种防治方法中,生物防治对烟叶生产的可持续发展具有较好的应用前景。放线菌是生防微生物的重要来源,在植物病害的生物防治中占有重要地位。本试验针对烟草黑胫病菌,主要进行了拮抗放线菌的筛选、发酵液抑菌活性研究、发酵液的稳定性及发酵条件的优化,并进一步探讨其生防控病机理及其防效。具体结果如下：1、采用对峙法将实验室已分离的30株放线菌进行初筛和复筛。初筛结果表明：21株放线菌对烟草黑胫病菌有拮抗活性,其中菌株YSL 5-2拮抗效果最好,达到了36mm。抑菌带宽在10mm以上的菌株有7株。复筛平板拮抗试验中,初筛时拮抗效果最好的7株放线菌均保持较好的拮抗作用,抑菌圈带宽达到了12～30mm。采用抑制孢子萌发法和抑制菌丝生长速率法测定平板复筛拮抗效果较好的11株放线菌发酵液对烟草黑胫病菌的抑制作用。测定表明：7株放线菌发酵液对烟草黑胫病菌孢子萌发有较好的抑制作用,抑制率均在50%以上,其中菌株CWA-4、LZ 2-7、SYZ 2-6对烟草黑胫病菌孢子萌发抑制率均达到100%。对烟草黑胫病菌菌丝生长抑制率达到80%以上有8株,抑制率在90%以上的有5株,其中菌株CWA-4对烟草黑胫病菌菌丝生长抑制率达96.97%。2、对4株拮抗效果较好的放线菌进行抑菌谱测定。结果表明：4株放线菌对23株供试病原菌有较好的抑制作用。菌株LZ 2-7、CWA-4、YYZ-8分别对5株供试病原菌抑菌带宽达15mm以上,对12株供试病原菌抑菌带宽达10mm以上。菌株YSL5-2的抑制效果最好,抑菌带宽达15mm以上的供试病原菌有22株,其中11株抑菌带宽达20mm以上。3、为了筛选一种拮抗放线菌较好的保存方法,选用斜面保存法、蒸馏水保存法、甘油保存法、液体石蜡覆盖保存法和砂土管保存法5种方法保存7株拮抗放线菌。试验结果显示：除保存6个月时蒸馏水保存法和液体石蜡保存法各有6株菌株对烟草黑胫病菌的拮抗活性较高,在3个月时甘油保存法有6株菌株拮抗活性较高,保存9和12个月时,采用甘油保存法保存7株菌株拮抗活性均为较高。由此可看出,甘油保存法较其他保存方法较好。但是,5种方法保存的菌株对烟草黑胫病菌拮抗活性在保存6个月比保存3个月时明显下降,说明5种保存方法对保持拮抗放线菌拮抗活性稳定性还不理想。4、初步研究了菌株LZ 2-7的发酵条件,确定了最佳发酵培养基配方和发酵条件。单因素发酵试验表明：最佳发酵培养基配方为：玉米粉10g、蔗糖10g、氯化钠2g、硫酸铵3g、碳酸钙2g、pH值7.2-7.4、蒸馏水1000mL。最佳发酵条件为：培养基初始pH为7.0,28℃培养,装瓶量为250 mL,摇床转速为140 r/min,培养5d左右抑菌物质活性达最高峰。以烟草黑胫病菌为指示菌,测定了菌株L Z 2-7、CWA-4发酵液的稳定性。结果表明：两个菌株随时间增长,抑制率不断下降,但在贮藏前30d两株放线菌抑制率均保持在80%以上,均有较好的抑菌活性,贮藏90d时,抑制率几乎下降三分之一,而且两株菌同一时间在4℃条件下贮藏抑菌活性较高。两个菌株都在弱酸性和中性条件时抑菌活性较高。温度在80℃以下抑菌活性都比较稳定,80℃以上随加热时间的延长,抑制率下降速率较快,尤其是发酵液CWA-4121℃处理30min抑制率下降至2.66%。在日光照射下两个菌株抑菌活性较稳定,但紫外光照射下,抑菌活性不断下降,尤其是菌株CWA-4经过4h紫外光的连续照射抑制率下降了27.84%。5、初步研究了菌株L Z2-7、CWA-4对烟草黑胫病菌的抑制机理。试验表明：放线菌对烟草黑胫病菌菌丝生长、游动孢子囊的产生、释放、游动孢子游动、萌发、病原菌的侵入及致病性都有明显的抑制作用。经放线菌发酵液处理的烟草黑胫病菌菌丝表现为菌丝凹陷、干瘪、皱缩、变形、菌丝溶解等现象。6、选用4株放线菌采用五种不同处理方法对烟草黑胫病进行温室控病试验。试验结果表明：只接入病原菌的发病对照CK2的发病率高达70%,而接入拮抗放线菌的烟苗发病率相对较轻,其中采用处理二接入菌株CWA-4的烟苗仅有一株发病,其相对防效达到了95.55%。4株菌株各处理的相对防效均超过50%,其中菌株CWA-4各处理的相对防效均在70%以上,菌株LZ 2-7各处理的相对防效均在69%以上。五种处理方法比较,菌株LZ2-7、CWA-4和YYZ-8采用处理方法五的相对防效较高,分别为93.64%、96.18%、73.24%；菌株YSL5-2采用处理方法二相对防效较好,为82.17%。不同菌株相对防效最好的处理方法不同,具体生产应用中可根据不同菌株选用适宜的处理方法。在接入病原菌7d、14d后,调查烟苗发病情况,计算拮抗菌相对防效的统计结果显示,施加拮抗放线菌对烟草黑胫病都有很明显的防控作用,总体来说,接病原菌后7d的防效均较高,随着时间的增长,防效有下降趋势。个别菌株也有例外,如菌株CWA-4处理五及YSL5-2处理一的相对防效较稳定。从选择对烟草黑胫病有长期、较好的防治效果的优良菌株来看,菌株CWA-4采用处理方法五防效最好,而且相对稳定。选用温室控病试验防效较好的菌株LZ 2-7和CWA-4进行小区防治试验。实验结果表明：放线菌发酵液对烟草黑胫病有较好的防治作用,处理后的烟草发病率和病情指数均明显低于对照。只接入病原菌的发病对照CK2的发病率高达46.67%,而接入拮抗放线菌的烟苗发病率相对较轻,其中采用处理方法五接入菌株LZ2-7的烟苗仅有3株发病,发病率为10%。菌株LZ 2-7五种施用方法中,处理五的防治效果最好,相对防效达74.32%。其次是处理三和处理一。菌株LZ 2-7与CWA-4同时采用第一种施菌方法,LZ 2-7的防治效果较好,相对防效达27.03%,而CWA-4的相对防效仅为10.84%。