基于代谢组学技术寻找日照绿茶标志性代谢物

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绿茶是中国的主要茶类之一,由于其未经发酵,保留了鲜叶的天然物质,研究表明,绿茶中含有茶多酚、儿茶素、叶绿素、咖啡碱、氨基酸、维生素等多种营养成分,具有提神清心、清热解暑、降火明目、防衰老、防癌抗癌、抑制心血管疾病等功能。日照绿茶产于山东省日照市,是“南茶北移”成功的范例,有“江北第一茶的美誉”。受气候、土壤等条件的影响,由于生长期长,昼夜温差大,光照强度低,漫射光多,日照绿茶各种营养物质的含量较丰富,具有干茶色泽翠绿油润,汤色黄绿明亮,栗香浓郁、回味甘醇的特点。但是,市场上绿茶种类繁杂,鱼龙混珠的情况严重,而日照绿茶区别于其他产地茶叶整体的成分变化规律还不明确,这就需要对日照绿茶和其他茶叶的化学组成进行系统地分析。本次实验应用基于液相色谱-质谱联用(Ultra Liquid chromatography mass spectrometry, UHPLC-MS)的代谢组学技术,对日照绿茶和市场上购买的低价绿茶进行了代谢组学分析。本实验使用的超高效液相色谱串联四极杆-轨道阱高分辨质谱的技术具有分离度高、分辨率高的特点,可以对茶叶样本中的物质进行更精确的测定。  本研究主要内容包括:⑴建立高效快速的超高效液相色谱-质谱联用分析方法,对不同茶树品种、不同产地的日照绿茶和低价绿茶化学组成进行分析测定,以便对数据进行多元统计分析。⑵运用超高效液相色谱-质谱联用分析方法对日照绿茶四个主要产区(五莲县、莒县、东港区、岚山区)的绿茶样本进行测定,并运用主成分分析和偏最小二乘判别分析对不同组的样品进行多元统计分析,结果显示,日照绿茶在PCA图上分离度不好,在对样本进行模型拟合时,R2X和Q2的值都偏小,模型的预测能力和可靠度较低,排列置换检验的结果也不理想,所以,我们推论,日照绿茶四个主要产区的茶叶样品没有很显著的差异,所以在PCA得分图上不能明显分开,在导致在模型拟合时,没有提取到可以使不同产地样本分离的有效的主成分,所以导致了模型的R2X和Q2偏小。⑶运用超高效液相色谱-质谱联用分析方法对不同茶树品种的日照绿茶样本进行测定,并运用主成分分析和偏最小二乘判别分析对不同组的样品进行多元统计分析,结果显示,在PCA得分图上,不同茶树品种的茶叶样本分布没有明显的规律性,所拟合模型的预测能力和可靠度也不理想,所以,我们推论,不同茶树品种的日照绿茶的差异也不明显,导致在模型拟合时无法提取到使不同样本分离的有效主成分,进而导致了模型拟合不理想的现象。⑷运用超高效液相色谱-质谱联用分析方法对日照绿茶和市场上购买的低价绿茶化学成分进行测定,并运用主成分分析和偏最小二乘判别分析对不同组的样品进行多元统计分析,结果显示,无论从正谱数据还是负谱数据上看,日照绿茶和低价绿茶间都有明显差异。两组样本在PCA和PLS-DA得分图上都可以有效分离,所拟合模型的预测能力和可靠度都比较高,PCA结果中,R2的值都大于0.6,PLS-DA结果中,R2都大于0.9。⑸通过多元统计技术,结合VIP值、p-value、含量等参数,对日照绿茶和低价绿茶两组样品中的差异性代谢物进行筛选,本实验选取VIP值大于1、p-value小于0.01、含量比值至少大于20倍的物质作为潜在差异代谢物,正谱中共筛选出90种潜在差异代谢物,负谱中筛选出30种潜在差异代谢物,这些物质在两组样品中的含量有非常显著的差异。
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