肠毒素大肠杆菌亚单位疫苗的研制

来源 :中国科学院微生物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:SHAWSHAW11
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肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起婴幼儿和旅游者腹泻的主要病原菌.CS3是ETEC的优势抗原之一,CS3蛋白是形成ETEC纤毛的结构亚基单位.为获得大量的CS3蛋白并研究其理化性质,构建了CS3的大肠杆菌表达载体pQE-CS3,在IPTG诱导下,获得16.7kDa的蛋白,诱导蛋白占总蛋白的53.8﹪.利用Ni-NTA亲和层析一步获得大量的重组蛋白,纯化蛋白量可达到57.88mg/L.免疫霍乱毒素B亚单位(CTB)或CS3可使人体对ETEC的感有保护作用.为探索研制ETEC双组分亚单位疫苗的可行性,首先利用大肠杆菌诱导表达系统表达了CTB与CS3的融合蛋白(CTB/CS3).Western印迹结果表明,诱导表达的29kDa的蛋白具有CTB和CS3蛋白双重抗原性.经Ni-NTA亲和层析纯化获得重组蛋白CTB/CS3,重性的重组蛋白可以部分形成五聚体并保留了与GM1结合的能力.植物生物反应器是一种安全和廉价的生物系统,尝试利用烟草作为生物反应器生产CS3蛋白.将CS3基因克隆到质粒pBin438中,构建植物表达载体pMCS3.在CS3基因中同框融合了烟草病程相关蛋白(PR1b)信号肽序列,以将CS3蛋白定向分泌到胞外.采用叶盘转化法,将含有pMCS3表达载体的根癌农杆菌LBA4404转化烟草K326,获得了一批转基因烟草植株.转基因烟草的PCR和Southern blot分析表明CS3基因已整合到烟草基因组中,转基因植株的Western blot显示pMCS3的转基因烟草可以有效的表达CS3蛋白.另外,该工作还构建了CTB和CS3融合蛋白的植物表达载体及其DNA疫苗载体,为比较在不同细胞器中融合蛋白CTB/CS3表达量、评估植物表达的融合蛋白CTB/CS3和其相应的DNA疫苗结合使用的免疫效果,做了实验设计和基础工作.
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