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前列腺癌是原发于前列腺上皮细胞的恶性肿瘤,在欧美占成年男性恶性肿瘤死亡原因的第二位。近年来,据不完全统计,每年全球有66万人被诊断出患有前列腺癌,其中约有25万人死于该疾病。因此针对前列腺癌的相关研究具有重要的意义。UNC5B是细胞膜受体,属于神经导向因子netrin-1家族受体之一,在神经及血管发育过程中起着重要的导向作用。netrin-1/UNC5B信号通路在乳腺癌、肺癌、结直肠癌及神经母细胞瘤中起抑制凋亡的作用,在凋亡过程中扮演着重要角色。netrin-1/UNC5B信号通路与泌尿系统肿瘤的相关机制目前罕见报道,本文就其与前列腺癌的关系进行了相关研究。本文实验内容主要分为以下几个部分:首先,在前列腺正常和癌细胞中,检测UNC5B和NTN1的表达情况,结果发现,UNC5B在雄激素依赖的前列腺癌细胞中表达量较高,而在雄激素非依赖的前列腺癌细胞中表达量较低,NTN1在癌细胞中表达量较高。所以推测UNC5B与AR之间可能存在某种联系。为了探索UNC5B与AR之间的关系,首先通过在LNCaP细胞中敲除UNC5B,检测AR的表达变化,结果发现,AR在mRNA水平上几乎没有发生变化,而在蛋白水平上显著下降,为了进一步探索相关机制,首先在蛋白水平检测了 AKT(total)的表达水平,结果发现AKT的蛋白水平下降明显,接着又针对LNCaP细胞,检测了 AKT1和AKT2的mRNA 水平,结果发现,在敲除UNC5B的LNCaP细胞中,AKT2的mRNA水平发生了明显的下降,说明UNC5B可能在转录水平上直接或间接的调控了 AKT2的表达。AKT和AR在前列腺癌的发生发展中都具有重要作用,所以值得进一步探索UNC5B调控AKT和AR的相关机制。另一方面,推测UNC5B可能影响了 AR的蛋白稳定性。在敲除UNC5B的LNCaP细胞检测了在泛素化降解中具有重要作用的PAK6,结果发现,敲除UNC5B后,PAK6的表达上升,与预期结果相一致。另外,还探索了 AR对UNC5B表达的影响。首先,在LNCap和LNCaP-AI细胞中检测UNC5B表达情况,结果发现在LNCaP-AI细胞中,UNC5B表达量明显高于LNCaP细胞,与预期结果不相一致,并且mRNA水平与蛋白水平不一致,猜想在LNCaP-AI细胞中可能存在不一样的机制。接下来,用DHT和Mib处理LNCap和LNCaP-AI细胞,结果在增加AR活性的条件下,UNC5B的表达仍无变化。综上所述,在LNCaP细胞中敲除UNC5B后,AR在mRNA水平上几乎没有变化,在蛋白水平上发生了明显的下降,而AKT在mRNA水平和蛋白水平都发生了明显的下降。但由于AKT与AR之间是相互调控的,所以关于UNC5B,AKT,AR三者之间的关系,还需要进一步的探讨。