论文部分内容阅读
目的考察甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶对常见的两大牙槽骨性疾病牙周炎和干槽症的局部治疗效果,并从细胞炎症和凋亡两个方面来分析一些特异性细胞因子在病理过程中的变化情况,为甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶的应用提供初步的药理学理论基础。方法牙周炎实验:72只6周龄健康雄性SD大鼠通过结扎法建立牙周炎模型,分为空白模型对照组(A组)、甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶组(B组)、盐酸米诺环素软膏组(C组)和甲硝唑凝胶组(D组),分别予以每日早晚各1次牙周袋和局部牙龈涂布。治疗过程中1、3、5周采集龈沟液并采用ELISA法检测液中PGE2含量;然后分别在给药后1周、3周、5周时麻醉状态下处死部分大鼠,取颌骨和牙周软组织病变部位常规按照骨组织的步骤开展固定、脱钙、脱水、包埋,制作完成石蜡切片,分别进行HE组织病理学染色以观察组织形态变化情况;TRAP染色分析局部牙槽骨的破骨细胞变化情况。干槽症实验:90只6周龄、健康雄性SD大鼠通过拔牙后剜除血凝块和拔牙创污染建立干槽症模型,分为空白模型对照组(A组)、甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶治疗组(B组)、盐酸米诺环素软膏治疗组(C组)、氯酸铝溶液组治疗(D组)和甲硝唑凝胶组(E组),氯酸铝浓缩液稀释后用注射器对创面局部滴洗,其他3种制剂均予以每日早晚各涂布一次的治疗,最长治疗时间为3周。分别在拔牙术后1周、2周、4周麻醉处死部分大鼠,同前述办法制作上颌骨病变部位的组织包埋蜡块并进行切片,HE染色后观察组织病理形态学变化;另外准备切片,进行TUNEL染色分析,计算牙槽窝局部牙龈组织细胞凋亡情况;进行IL-10免疫组织化学实验,分析牙槽窝周边牙龈组织细胞IL-10的表达情况。结果实验用的牙周炎模型和干槽症模型均制作成功。大鼠龈沟液PGE2的变化表现与牙周炎严重程度相关,即PGE2增高,炎症加重,随着药物治疗炎症得到抑制后,PGE2呈现下降。3种药物干预后影响PGE2变化最明显的是甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶,与单纯甲硝唑凝胶比较存在差异(P<0.05)。HE染色组织形态观察,未经药物处理的模型对照组,明显可见牙周膜和牙龈组织内炎性细胞弥漫浸润,并向根方迁移,牙周袋逐渐变深、牙周韧带纤维排列不规则,重者极为紊乱,附着上皮的结合位点向牙根方向延伸,牙槽骨吸收明显且牙槽嵴顶形态极为不规则,明显变平且高度下降。经过甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶治疗3周后,牙周韧带出现修复,骨吸收明显抑制且有修复发生,牙周袋变浅,在第五周时,骨修复更加明显且密度有增加现象发生,牙周胶原纤维破坏得到修复,断裂明显减少,炎症明显减轻。TRAP染色方面,大鼠牙周炎模型的破骨细胞活跃,随着时间延长,破坏加重,经过药物干预后,破骨细胞活动明显减少,甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶和派力奥均能够显著降低破骨细胞数量,与单纯甲硝唑凝胶存在统计学差异(P<0.05),与未经治疗的空白模型对照相比,差异更为明显(P<0.01)。TUNEL染色分析干槽症疾病过程中存在细胞凋亡;四种药物治疗后细胞凋亡指数均呈明显降低趋势,具有统计学意义(P<0.05),其中以甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶治疗后的细胞凋亡指数下降最为明显。IL-10免疫组织化学结果发现干槽症牙龈组织在没有药物干预时,前2周IL-10变化未出现统计学差异;药物干预后的IL-10阳性细胞计数明显增加,其中甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶和派力奥软膏组在干预后一周就能够明显增加IL-10阳性细胞计数,一直持续到第二周和第四周,分别与空白模型组和单纯甲硝唑凝胶组比较,均存在统计学差异(P<0.05);氯酸铝治疗后第一周IL-10表达与模型组相比存在差异,在第二周与第四周样本中更为明显,但与甲硝唑凝胶组比较差别不明显;甲硝唑凝胶组在术后第一周局部牙龈组织细胞的IL-10表达与模型组差别不大,在第二周和第四周存在统计学差异。结论唑羧甲基壳聚糖凝胶等试药具有减轻大鼠牙周炎炎症、减少骨吸收、促进愈合的作用;局部药物治疗的药理学效应可能与疾病过程中抑制病变部位PGE2的表达和减少破骨细胞的活动相关;三种试验药物中,甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶在大鼠牙周炎模型中抑制PGE2的表达和减少破骨细胞的活动效应最强,疗效和派力奥软膏相当,要优于甲硝唑凝胶。大鼠干槽症炎症过程中存在细胞凋亡,药物干预会产生抗细胞凋亡效应,不同的药物干预的效果可能存在差异,其中以甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶治疗后的细胞凋亡指数下降最为明显;大鼠干槽症炎症过程中局部药物干预会促进拔牙创周边牙龈组织细胞IL-10的表达,其中甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶和派力奥软膏的作用要优于甲硝唑凝胶。