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牛支原体是牛的一种常见却常被忽视的致病性病原,常导致牛只呼吸性疾病、乳房炎、关节炎等疾病。自2008年在湖北省首次发现以来,我国已超过10省份均有牛支原体暴发的报道。牛群在长距离运输后更易发病,感染率为50%-100%,致死率高达10%-50%,给我国养牛业造成严重的经济损失。适配体(Aptamer)是由指数富集配体系统进化(Systematic Evaluation Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)技术筛选而来的DNA或RNA单链分子,它可以以类似抗原-抗体的方式与靶物质特异性结合。本研究使用原核表达的P48蛋白进行牛支原体单克隆抗体的筛选。筛选得到的单克隆抗体株10E可识别所有牛支原体菌株(模式株PG45,中国分离株Hubei-1、SD-2、GY-2、PD-2、HRB-1、HY-1、HG-1),与其它相关病原(无乳支原体、精氨酸支原体、牛鼻支原体、牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型)无交义反应,亲和力高达6×1010 L/M。我们同样采用微孔板作为介质,成功筛选到了 P48蛋白高亲和力、高特异性单链DNA适配体。在9条候选适配体中,/用间接ELAA和Dot Blotting测得WKB-14具有高的亲和力和特异性。使用P48蛋白高亲力、高特异性的单抗10E和适配体WKB-14,我们建立了两种特异、敏感的竞争血清学检测方法(直接竞争ELISA, Dc-ELISA和间接ELAA, Ic-ELAA)用以检测血清中牛支原体抗体。此两种方法阴阳性临界值PI分别为32%和40%,与无乳支原体、精氨酸支原体、牛鼻支原体、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸性合胞体病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型抗血清无交叉反应,具有良好的特异性。在165个牛血清临床样本检测中,本研究建立的两种方法阳性检出率均高于于两种商品化间接ELISA试剂盒。据我们所知,这是首次将核酸适配体用于建立抗体检测的应用报道。最后,我们建立了两种快速,灵敏,可靠的牛支原体血清学诊断方法,能促进牛支原体监测,协助研究人员了解牛支原体的生态和流行病学。