论文部分内容阅读
背景与目的:组蛋白乙酰化通过调控海马神经元树突棘重塑调控认知功能,前期研究显示孕期母体接受氯胺酮麻醉可致子代学习记忆损害,但组蛋白乙酰化在其中的作用不清楚。孕中期有部分孕妇不得不接受非产科手术,因此本研究探讨组蛋白乙酰化调控树突棘重塑在孕中期母体接受氯胺酮麻醉腹部手术致子鼠认知功能损害中的作用。方法:将孕SD大鼠随机分为氯胺酮麻醉组(Ket组)、氯胺酮麻醉腹部手术组(Surg组)和对照组(C组),每组10只。于孕14天,Ket组母鼠单纯氯胺酮麻醉2h;Surg组母鼠在氯胺酮麻醉下行腹部探查手术,整个麻醉和手术时间为2h;C组予以等体积生理盐水溶液。子鼠出生后随机分为Suberoylanilide Hydroxamic Acid(SAHA)、Senegenin(SEN)和溶媒Dimethyl Sulfoxide(DMSO)亚组,出生后第1天开始,SAHA亚组、SEN亚组和DMSO亚组子鼠分别经腹腔注射HDAC2抑制剂SAHA 50 mg/kg、SEN 15 mg/kg或等体积的DMSO溶液,每天1次,连续14天。于子鼠出生后第7、22、30天分别用悬崖回避实验、旷场实验和Morris水迷宫实验评价子鼠空间感知能力、焦虑相关行为和空间学习记忆功能。水迷宫实验结束后的第2天(即P36天),取子鼠海马组织,紫外分光光度计法测定其中HDACs(histone deacetylases)和HAT(histone acetyltransferases)活性,Q-PCR、Western Blot测定NEDD9和PSD-95 mRNA和蛋白表达水平,高尔基染色测定子鼠海马神经元树突棘密度和类型。结果:悬崖回避结果显示,与对照组比较,氯胺酮麻醉手术组子鼠得分值显著下降(1.56±0.21 vs.1.27±0.24);旷场实验结果在三组之间无显著差异;Morris水迷宫结果显示,与对照组比较,孕中期氯胺酮麻醉腹部手术可引起子鼠逃避潜伏期延长、穿越平台次数(5.26±1.29 vs.3.90±1.17)和靶象限停留时间缩短(30.07±5.42 vs.22.93±7.32);氯胺酮麻醉手术可增强HDACs活性(203.57±39.24 vs.266.21±73.01),下调NEDD9(1.04±0.09 vs.0.55±0.16)、PSD-95(1.00±0.17 vs.0.53±0.12)蛋白表达水平,同时可降低海马区树突棘密度,但不引起NEDD9、PSD-95 mRNA、树突棘类型、HAT活性改变。单纯氯胺酮麻醉组上述指标无明显改变。SEN可缩短氯胺酮麻醉腹部手术组逃避潜伏期,增加穿越平台次数和靶象限停留时间,同时可引起NEDD9(0.55±0.16 vs.0.98±0.29)、PSD-95(0.53±0.12 vs.0.98±0.20)蛋白表达水平和树突棘密度增加。SAHA组上述指标无显著性差异。结论:本研究表明,在本研究条件下孕中期母体单纯氯胺酮麻醉对子代认知功能无明显影响,氯胺酮麻醉腹部手术可引起子鼠空间感知和空间学习记忆功能损害,机制与其增强子代海马区HDACs酶活性、下调NEDD9和PSD-95蛋白表达水平和树突棘密度有关。传统中药SEN对氯胺酮麻醉腹部手术所致子代空间学习记忆功能损害有改善作用,机制与其增加NEDD9和PSD-95蛋白表达水平和树突棘密度有关。