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目的:建立耐甲氨蝶呤(MTX)对映体的人白血病细胞株CCRF-CEM和BALL-1细胞株,分析在加药前后蛋白表达的差异性。方法:采用低剂量诱导结合浓度递增的方法来建立MTX对映体诱导的两株亲本细胞的耐药细胞株,并且用倒置显微镜来观察在MTX对映体作用前后CCFR-CEM和BALL-1细胞株形态学变化和活性的差异。采用双向凝胶电泳技术来对MTX对映体作用后耐药细胞株与亲本细胞株的总蛋白进行分离,用凝胶扫描仪来进行对比找出差异蛋白点,结合质谱分析仪和数据库信息检索来鉴定差异蛋白点。结果:在蛋白定量上:CCRF-CEM,D-(-)MTX-CCRF-CEM,L-(+)-MTX-CCRF-CEM,BALL-1,D-(-)MTX-BALL-1,L-(+)-MTX-BALL-1的结果分别是36.17mg/ml,38.54mg/ml,41.09mg/ml,37.28mg/ml;作为亲本细胞的对照组CCRF-CEM和BALL-1检测到的平均蛋白点数分别为295±14和421±12个,平均蛋白点的匹配百分率为82.57%和85.13%。而加入药物的的实验组D-(-)MTX-CCRF-CEM,L-(+)-MTX-CCRF-CEM,D-(-)MTX-BALL-1,L-(+)-MTX-BALL-1检测到的平均蛋白点数分别为316±10,302±9,445±11,432±7个,平均蛋白点的匹配百分率为85.27%,84.72%,86.89%,89.35%。设定蛋白点体积差异倍数>2倍以上为差异有统计学意义。与CCRF-CEM比较,D-(-)MTX-CCRF-CEM有15个差异明显的蛋白点,而L-(+)-MTX-CCRF-CEM中6个差异明显的蛋白点,有4个在实验组中表达,而另外两个是实验组不表达而对照组表达。与BALL-1相比较,D-(-)-MTX-BALL-1有17个差异明显的蛋白点在实验组中高表达,而L-(+)-MTX-CCRF-CEM则有12个差异明显的蛋白点,其中有10是实验组高表达,另外两个蛋白点是实验组不表达而对照组表达的蛋白点。结论:加入药物的CCRF-CEM和BALL-1的蛋白表达会多于对照组,其中加入D-(-)-MTX药物蛋白表达要明显多于L-(+)-MTX,而在加入L-(+)-MTX后的实验组会少表达某些正常细胞的蛋白。