论文部分内容阅读
论文一：wntl通过促进TCF4和PPAR-γ上调巨噬细胞清道夫受体CD36的表达研究背景清道夫受体家族B类成员CD36调控了巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的吞噬,同时也在巨噬细胞的生理活动中发挥了重要作用。但是,CD36在巨噬细胞中本地表达的调控机制还未明了。目的本研究主要探索wntl在巨噬细胞的生理作用,并深入研究了wntl调控巨噬细胞清道夫受体CD36表达的分子机制以及wntl在单核细胞向巨噬细胞分化过程中的表达机制。方法本研究中,我们探讨了由单核细胞加GM-CSF刺激分化而来的巨噬细胞中wntl与CD36之间的联系。转染wntl的siRNA或是wntl过表达质粒,巨噬细胞中CD36表达分别呈现下调或上调。通过使用β-catenin的抑制剂,转染PPAR-γ的siRNA或TCF4的siRNA,我们证实了wntl通过促进PPAR-γ和TCF4上调CD36表达。免疫共沉淀,染色质免疫共沉淀及免疫荧光的方法进一步发现β-catenin可以和PPAR-γ发生互作,而PPAR-γ又可以与TCF4在核内发生共定位。同时,转录因子pax3在单核向巨噬分化过程中调控wntl表达也通过western blot被证实。结果我们的研究证实了由单核细胞加GM-CSF刺激分化而来的巨噬细胞中,wnt1通过激活PPAR-γ和TCF4转录因子促进了CD36的表达。结论我们的发现提示了wntl通过激活wnt经典通路,在巨噬细胞生理过程中发挥了重要作用。论文二：MicroRNA-29a通过靶向QKI (quaking)促进了单核细胞向巨噬细胞分化过程中SRA的表达背景在单核细胞向巨噬细胞分化过程中,miR-29a和清道夫受体-SRA上调,而RNA结合蛋白QKI下调。由于巨噬细胞表达的SRA受体在动脉粥样硬化疾病中的重要性加上我们之前的工作已发现miR-29a可以上调SRA,探讨SRA调控的内在机制显得尤为重要。已有工作分别联系了miR-29a与SRA和QKI同单核-巨噬分化。但三者之间在单核-巨噬分化时是否存在着相互联系还未知晓。目的深入研究miR-29a上调SRA的详细机制,进一步发现单核向巨噬分化过程中,miR-29a, SRA和QKI三者之间的内在联系。方法本研究中,我们首先运用qRT-PCR和western blot的方法验证了在单核细胞向巨噬细胞分化时miR-29a升高,QKI表达下降。在巨噬细胞中分别转染miR-29a的模拟物和抑制物后检测了QKI的蛋白表达变化,结合荧光素酶报告基因技术验证了QKI是miR-29a的靶基因。信息学分析发现SRAmRNA的3’UTR上存在一个QKI结合靶位(QRE区)。因此我们深入探讨了QKI与SRA的关系。通过在巨噬细胞中过表达或敲低QKI,我们发现QKI在转录水平上抑制了SRA。借助于荧光素酶报告基因技术,我们验证了QKI可以和SRAmRNA上QRE区直接结合。另外,油红试验的开展进一步证实QKI可以通过作用于SRA抑制巨噬细胞脂质吞噬功能。结果我们发现miR-29a通过结合于QKI的3’UTR抑制了QKI的表达,而QKI通过作用于SRAmRNA的3’UTR上的QRE区促进了SRAmRNA的降解。结论miR-29a通过靶向RNA结合蛋白-QKI对单核细胞向巨噬细胞分化过程中SRA的上调发挥了重要作用。