山东某造纸厂造纸黑液CODcr为120000 mg/L左右,pH为12-13,水质成分复杂,富含难降解有机污染物。取造纸厂强碱性造纸黑液储水池沉积物,对其中的产甲烷菌进行富集,构建产甲烷菌功能基因McrA的基因组文库,分析其中产甲烷菌的构成。在此基础上,利用从造纸黑液沉积物中筛选的得到一些产酸菌株和富集得到的产甲烷菌富集菌液构建产酸菌群和产甲烷菌群,采用上流式污泥床厌氧反应器(UASB)污泥进行驯化处理废纸造纸黑液并利用DGGE手段分析添加的产酸菌群以及产甲烷菌群在反应器中的作用。其次,对富集得到的产甲烷菌富集菌群进行厌氧菌分离得到一株能够利用甘油生产1,3-丙二醇的产酸克雷伯氏菌,对该菌株利用甘油产1,3-丙二醇的条件进行了摸索。1、利用产甲烷菌富集培养基通过对取样得到的造纸厂强碱性造纸黑液储水池沉积物进行产甲烷菌的富集,得到了分别以甲酸钠和H2/CO2为底物的产甲烷菌富集菌液。对得到的两种以甲酸钠和H2/CO2为底物的富集菌液中产甲烷菌的McrA基因进行扩增并构建McrA基因文库发现该菌群含有大的Methanoculleus属菌株。2、利用从造纸黑液沉积物中筛选的得到梭菌Clostridium sp.YC3、盐单胞菌Halomonas sp.Y2和盐单胞菌Halomonas sp.19-A和富集得到的产甲烷菌富集菌液构建产酸菌群和产甲烷菌群,通过驯化,实现了对强碱性造纸黑液的初步处理,通过DGGE分析产酸菌群以及产甲烷菌群在反应器中的作用发现添加的Clostridium sp.YC3含量随着进水污水浓度的增高在污泥中的含量也有所增加,Halomonas sp.污泥中的含量先增高后降低,但还能维持一定的量。而产甲烷菌富集菌群中占据优势的Methanoculleus sp.在添加产甲烷富集菌群前并不存在于UASB中,但添加产甲烷富集菌群后Methanoculleus sp.逐渐显示出稳定存在,说明产甲烷菌富集菌群在厌氧菌群中占据了一定的优势,且发挥了重要作用。3、通过对富集得到的产甲烷菌富集菌群进行厌氧菌分离得到一株能够利用甘油生产1,3-丙二醇的产酸克雷伯氏菌,对其发酵条件进行了优化,最终补料分批发酵。