神经营养因子是一类能够促进神经细胞存活、生长、分化的多肽分子,在神经系统发育、分化和损伤修复过程中具有重要作用。Neurturin(NTN)是一种新发现的神经营养因子,它能特异的作用于中脑多巴胺能神经元及运动神经元,对于以多巴胺代谢紊乱为特征的神经系统疾病如帕金森氏病的治疗具有重要的临床意义,由于基因工程所制备的重组人NTN(hNTN)难以通过血脑屏障以及在体内易被代谢成为无活性的代谢物而致半哀期短,需反复给药,副作用大,所以不能达到很好的治疗效果。因此,基因治疗将是一种有效而特异的治疗手段,因为其可以在靶部位长期稳定的表达目的蛋白,使活性蛋白直接在靶部位持续的发挥作用。本文就人NTN真核表达载体的构建,转染Vero细胞并筛选获得稳定表达细胞株,以及稳定细胞株所表达的hNTN的生物活性测定等进行了系统的研究。首先,构建hNTN的pcDNA3真核表达载体,经测序鉴定后体外扩增获得大量克隆。其次,用构建的pcDNA3/hNTN真核表达载体转染Vero细胞,并通过筛选获得稳定表达hNTN的细胞株,阳性率达80%以上。最后,对稳定细胞株所表达的hNTN的生物学活性进行测定。实验表明,其表达的hNTN在体外能够促进培养的鸡胚背根神经节长出神经突起,并能促进体外培养的大鼠胚胎中脑多巴胺能神经元的存活。本研究报道了稳定表达hNTN的Vero细胞的获得,及其表达的hNTN对体外培养的中脑多巴胺能神经元的保护作用,此项工作为后续移植治疗帕金森氏病模型猴做了前期研究工作,同时也为帕金森氏病的基因治疗研究打下了基础。