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研究背景:ALK间变性淋巴瘤激酶基因的突变在很多恶性肿瘤中都会发生[1],2007年,Soda等人在非小细胞肺癌中发现,ALK基因可以和棘皮动物微管相关蛋白样4基因融合,形成EML4-ALK融合基因[2]。该融合基因的编码产物,具有强烈的促恶性变和致癌效应[3]。发生ALK突变的肿瘤组织的生长,侵袭,迁移等都依赖于ALK信号通路的持续活化,而该信号通路可以被ALK酪氨酸激酶抑制剂很好的抑制。克唑替尼是针对ALK,MET[4],ROS1[5]等的多靶点酪氨酸激酶抑制剂,它对有ALK+的NSCLC患者的治疗效果超过了传统的化疗药物[6][7]。近来,PROFILE 1014等临床试验的研究结果显示:将克唑替尼作为一线治疗药物治疗ALK+NSCLC患者,能显著的改善患者的PFS和ORR,从而将克唑替尼作为治疗之前未接受过克唑替尼治疗的ALK+NSCLC患者的标准方案,该方案同时具有良好的安全效应[8]。但是,让人遗憾的是,在几乎所有的接受治疗的患者中,最终不可避免的出现了获得性耐药,限制了克唑替尼的临床使用。因此,克服克唑替尼的获得性耐药的治疗策略成为迫切的需要。目前,针对克唑替尼获得性耐药的机制研究尚未完全阐明[9],类似于EGFR-TKI获得性耐药的看家基因T790M突变,包括L1196M,L1152R,C1156Y,and F1174L等突变在克唑替尼耐药的样本中被频频发现[10][11],此外,IGF-1R信号通路也被报道与克唑替尼耐药相关,长期抑制ALK酪氨酸激酶,会导致IGF-1R信号通路的活化,同时,联合IGF-1R抑制剂可以使已经耐药的细胞恢复对克唑替尼的敏感性[12]。因此,IGF-1R信号通路成为ALK+NSCLC的潜在治疗标靶。二甲双胍是一种经典降糖药物,其在临床上的运用已经超过40多年,此外,有报道指出,使用二甲双胍的患者,其肿瘤发生的风险和预后均显著优于未接受二甲双胍治疗的患者[13],从而使许多研究者关注其抗肿瘤效应。我们之前的研究中曾发现,二甲双胍联合吉非替尼或厄洛替尼,对EGFR-TKI耐药细胞株的增殖,迁移和侵袭均有显著的协同抑制效应[14]。但是二甲双胍能否克服克唑替尼的耐药却仍是未知数,有趣的是,二甲双胍还被报道过具有抑制IGF-1R信号通路的效应[15][16]。这些研究发现启示我们,是否能够将二甲双胍与克唑替尼联合使用,通过二甲双胍抑制IGF-1R信号通路的效应,从而克服克唑替尼的获得性耐药。在我们的研究中展示了二甲双胍联合克唑替尼能够在克唑替尼敏感的H2228和H3122以及克唑替尼耐药的H2228-CR和H3122-CR细胞中,对细胞的增殖、迁移、侵袭等的抑制上具有协同效应。二甲双胍所发挥的增敏效应归因于其抑制IGF-1R信号通路的活化,我们提供了理论性的和实验数据证实了二甲双胍联合克唑替尼能够克服ALK+NSCLC对克唑替尼的耐药。目的:尽管克唑替尼对ALK+NSCLC患者的治疗效果显著,但是患者最终几乎难以避免的会出现获得性耐药,有研究报道通过抑制IGF-1R信号通路的活化能够克服对克唑替尼的耐药。方法:通过MTT实验,侵袭实验,KI67实验,流式细胞实验,Western Blot实验和克隆形成实验等体外实验证实二甲双胍能够逆转克唑替尼的耐药结果:研究揭示了二甲双胍这种广泛运用于临床的降糖药物,能够有效的增强ALK+肺癌克唑替尼敏感和耐药细胞对克唑替尼的敏感性,其具体证据表现在抑制细胞的增殖和侵袭,同时增强细胞凋亡等。二甲双胍抑制IGF-1R信号通路的活化,还能够因此克服外加IGF-1诱导的对克唑替尼的耐药。结论:对ALK+NSCLC患者来说,二甲双胍与克唑替尼联合使用,能够克服克唑替尼的耐药,延长患者的生存时间。