玉米赤霉烯酮降解菌的筛选鉴定及降解特性研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:wangchun2000
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由镰刀菌产生的玉米赤霉烯酮(ZEN)在世界各地的粮食作物及产品中普遍存在,是对人和动物危害最为严重的霉菌毒素之一。传统的物理和化学脱毒方法存在一定的缺陷,因此微生物脱毒方法成为近年来国内外研究的热点。为了筛选高效降解ZEN的微生物,本试验一选取各种动物肠道食糜或粪便、霉变的饲料和食品、各地区不同环境的土壤等作为样本,利用微生物去毒法,以ZEN作为唯一碳源和能源依次进行初筛、复筛ZEN降解菌,菌液毒素终质量浓度为5μg/mL,并通过高效液相方法检测所分离到的细菌对ZEN毒素的降解能力。结果显示:14株菌株具有ZEN降解能力,降解率在8.3%-87.1%之间,其中一株从石油污染的土壤中分离筛选并命名为红球菌SYA13的菌株,与ZEN培养基共孵育72h能高效降解ZEN,降解率高达87.1%,明显高于其他菌株。通过对SYA13菌株进行细胞形态学、生理生化鉴定以及分子生物学鉴定,可确定SYA13菌株为红球菌,命名为Rhodococcus sp.SYA13(登录号KP060098.1)。为了初步了解该菌株的降解特性,本试验二将菌株SYA13的发酵培养48h,取发酵液对其进行组分分离,分别与ZEN共孵育24h,通过HPLC检测,结果显示,菌体细胞、胞内提取物、发酵上清液的降解率分别为63.9%,43.7%和35.0%,初步鉴定其降解活性成分可能为胞内酶。为了研究该菌的安全性以及对动物ZEN中毒症状是否有缓解作用,本试验三将试验小鼠随机分成4组,每组10只,第一组:对照组,第二组:ZEN毒素处理组,第三组:SYA13处理组,第四组:ZEN+SYA13组,腹腔注射给药,每次剂量为0.2mL,每天2次,连续15d,试验结束后空腹摘小鼠眼球采血,做血常规检测,分离血清做血液生化指标测定,结果显示,试验期间小鼠无死亡病例,存活率为100%;ZEN组白细胞总数(WBC)较ZEN+SYA13组差异显著(p<0.05),ZEN组与SYA13组比较差异显著(p<0.05);ZEN组红细胞总数(RB3C)虽高于对照组但低于SYA13组和ZEN+SYA13组,ZEN组血红蛋白(HGB)与对照组比较差异显著(p<0.05);ZEN组的血小板总数(PLT)较对照组高,SYA13组和ZEN+SYA13组的血小板总数(PLT)均低于对照组;ZEN组的ALT指标高于对照组数值,差异显著(p<0.05),ZEN+SYA13组ALT指标与ZEN组比较,差异显著(p<0.05):ZEN+SYA13组AST指标低于其他三组,且与对照组、ZEN组均差异显著(p<0.05);ZEN组的TP指标和ALB指标数值均低于其他三组,与ZEN+SYA13组差异显著(p<0.05);ZEN组的尿素氮、UA均高于其他三组,与ZEN+SYA13组比较差异显著(p<0.05);上述结果表明,ZEN组对小鼠血液有一定的毒性,且对肝脏和肾脏具有一定的损伤,菌株SYA13发酵液在一定程度上可缓解玉米赤霉烯酮对小鼠血液、肝脏、肾脏的损伤。
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