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目的:研究Cathepsin L在谷氨酸受体介导的神经兴奋性毒性中的作用及机制。
方法:采用脑立体定位纹状体内给药法,建立谷氨酸受体介导的大鼠神经兴奋性毒性的体内模型,尼氏染色法观察Cathepsin L抑制剂Z-FF-FMK和1-Naphthalenesulfonyl-IW-CHO(以下简称NaphthaCHO)对模型大鼠纹状体神经元的保护作用;Western Blot检测喹啉酸(Quinolinic acid,QA)引起的IκBα(inhibitor of NF-κB, alpha isoform), p-IκBα(phospho-IκB alpha)和Cathepsin L蛋白表达的时程变化;Western Blot检测Z-FF-FMK和NaphthaCHO对模型大鼠纹状体内IκBα、p-IκBα变化的影响,免疫组织化学法检测Z-FF-FMK和NaphthaCHO对模型大鼠纹状体内核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)激活的影响;Western Blot检测Z-FF-FMK和NaphthaCHO对凋亡相关蛋白p53、caspase-3和自噬相关蛋白Beclin1、LC3、P62蛋白表达的影响。
结果:本实验成功建立了大鼠神经兴奋性毒性的体内模型。尼氏染色结果显示,Z-FF-FMK和NaphthaCHO给药组与模型组相比,损伤面积显著减小,神经元数目显著增多;Western Blot结果显示,模型大鼠纹状体内IκBα表达下调,p-IκBα和Cathepsin L表达上调;Z-FF-FMK和NaphthaCHO可对抗QA模型大鼠纹状体中IκBα降解和磷酸化,免疫组化结果显示Z-FF-FMK和NaphthaCHO可抑制QA模型大鼠纹状体内NF-κB的核转位;Western Blot结果显示Z-FF-FMK和NaphthaCHO可抑制QA引起的p53、caspase-3表达水平的上调、Beclin1、LC3上调以及P62的下调。
结论:谷氨酸受体介导的神经兴奋性毒性中,Cathepsin L抑制剂Z-FF-FMK和NaphthaCHO通过抑制谷氨酸受体介导的IκBα的降解和磷酸化、NF-κB的核转位,最终阻断NF-κB信号通路,从而对谷氨酸受体激活引起的纹状体神经元损伤起保护作用。