水稻ALOG家庭基因研究及G1L1参与水稻柱头发育的分子生物学机制

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水稻ALOG(Arabidopsis LSH1and Oryza G1)基因家族有10个成员(G1,G1L1~G1L9),其中已有三个基因G1、G1L5和G1L6被报道有功能,它们通过不同方式参与水稻小穗花发育过程,除此之外其它水稻ALOG家族成员的基因功能未被阐明。本实验着重研究除G1,G1L5和G1L6之外的ALOG家族成员基因的功能,并在此基础上研究G1L1参与水稻柱头发育的机制。
  该研究运用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除ALOG基因全部成员,获得它们敲除植株,并构建除G1,G1L5和G1L6之外的其他7个成员的过表达系。通过观察,除已被报道的有表型外其他敲除系与过表达系未出现表型。由于ALOG成员之间序列相似,因此推测其功能存在冗余,因此,单独敲除这7个基因可能不会引起发育上的缺陷。通过嵌合抑制基因沉默技术(CRES-T),研究这些基因的冗余性。具体来说就是将某一个转录因子与EAR-motif抑制域(SRDX)融合(末端增加12个氨基酸),使得融合蛋白竞争性地结合该转录因子及其冗余因子的调控区域,从而起到抑制该转录因子及其冗余因子的作用。构建了G1L1和G1L3的嵌合抑制沉默基因植株,G1L1-SRDX和G1L3-SRDX株系,观察发现G1L1-SRDX转基因植株柱头发育出现缺陷,退化的柱头异常发育,育性降低。说明G1L1及其冗余因子参与柱头发育。类似地,还发现G1L3还参与水稻株高的生长。对于ALOG家族成员的进一步的研究显示,G1L1是一个转录因子,且在细胞核里表达;G1L7没有转录激活活性,在细胞核、细胞质和细胞膜上表达。本研究中,运用分子生物学技术,揭示ALOG家族成员G1L1冗余性地参与水稻花柱发育。为进一步研究水稻花柱发育机理提供线索。
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