【摘 要】
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近些年来,血栓疾病发病率升高,对人们生活产生严重影响,而通过纤溶溶栓是治疗血栓类疾病的重要方法。而微生物具有种类繁多、繁殖速度快、生长条件容易控制等优点,使得微生物源纤溶酶在制备预防和辅助治疗血栓性疾病的保健品及药物开发方面备受关注。因此,如何通过经济且高效的方法获取纤溶酶显得尤为重要。本研究针对如何从传统发酵豆豉中筛选出产纤溶酶的芽孢杆菌,对其所产的纤溶酶进行酶学性质等研究具有重大意义,主要研究
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近些年来,血栓疾病发病率升高,对人们生活产生严重影响,而通过纤溶溶栓是治疗血栓类疾病的重要方法。而微生物具有种类繁多、繁殖速度快、生长条件容易控制等优点,使得微生物源纤溶酶在制备预防和辅助治疗血栓性疾病的保健品及药物开发方面备受关注。因此,如何通过经济且高效的方法获取纤溶酶显得尤为重要。本研究针对如何从传统发酵豆豉中筛选出产纤溶酶的芽孢杆菌,对其所产的纤溶酶进行酶学性质等研究具有重大意义,主要研究结果如下:（1）采集家庭制作式豆豉样品50份,通过脱脂乳平板、纤维蛋白平板筛选出9株产纤溶酶的菌株,其中DC6发酵上清液酶活最高,为1072.66 U/m L,经鉴定确认其为芽孢杆菌。（2）将芽孢杆菌DC6的发酵上清液进行盐析、CM-Sephadex C-25离子交换层析和Sephadex G-75凝胶柱层析后,获得纯化酶BF6;纯化酶通过SDS-PAGE电泳获取到一条分子量约为30 KDa的条带。纯化后的纤溶酶活性是纯化前的17.31倍,产率为5.61%,比活性从3469.22 U/mg提高到60057.14 U/mg。（3）对BF6进行酶学性质研究,结果显示BF6的最适温度和最适p H值分别为37℃、10.0,其活性在55℃以下和p H 6-11能保持较好的稳定性;因BF6会被乙二胺四乙酸、苯甲基磺酰氟和胰凝乳蛋白酶抑制剂所抑制,故该酶可能属于胰凝乳蛋白酶样的金属丝氨酸蛋白酶;BF6可以通过直接和间接的两种方式降解纤维蛋白;其降解纤维蛋白（原）的机制显示,1 min内能快速降解完Aα、Bβ链,而降解γ链时间较长;BF6在37℃孵育6 h后的溶血溶栓结果显示,体外溶血率＜5%,体外溶栓率为40.8%。（4）使用单因素法、Plackett-Burman试验设计和Box-Behnken试验对芽孢杆菌DC6产纤溶酶进行培养条件优化,最终确定产酶最优的条件为:在糊精10 g/L、大豆蛋白胨10.3 g/L、KH2PO48.8 g/L,初始p H 7.0、装液量90 m L/250m L、接种量2%下33℃、220 r/min培养24 h,纤溶酶活可达4505.89 U/m L;酶活提高3.6倍。综上所述,该研究从传统发酵豆豉中筛选分离出一株高产纤溶酶的芽孢杆菌DC6,分离纯化其产的纤溶酶,并研究纯化后的纤溶酶BF6酶学性质等,最后优化芽孢杆菌DC6产纤溶酶的培养条件;以期为纤溶酶的酶学性质和产量提升研究提供些许的理论依据。
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