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目的:急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是由于弥漫性肺泡、毛细血管膜损伤导致的以非心源性肺水肿和炎症为病理特征的急性呼吸衰竭,是临床危重症,虽然经过近100年的不断医学探索,但其死亡率高达40-50%[1]。其发病机制、救治方法是现代医学研究的重点、热点。根据创伤、感染、药物、组织缺血-再灌注损伤等已知的临床危险因素复制的ARDS模型,是研究其发病机制及治疗方法的必要条件。肺脂肪栓塞(pulmonary fat embolism PFE)的诊断标准是肺实质中发现脂肪滴,多发生于长骨骨折、吸脂术患者中,严重者可引发ARDS和脂肪栓塞综合征。脂肪栓塞综合征(fat embolism syndrome FES)是指脂肪颗粒阻塞血管腔而引起的一系列病理生理改变的临床综合征,其主要症状为呼吸困难,低氧血症,无头部外伤的神经症状和皮肤黏膜出血点。虽然Zenker于1862年首次对PFE及FES进行描述,但肺脂肪栓塞引起ARDS的发病机制目前尚未完全明了,目前的学说有机械阻塞理论、生物化学炎症反应理论、肺循环障碍凝结理论、细胞凋亡理论、基因发病理论。本实验选用同种骨髓脂肪作为栓子更符合实际发病机制。在用同种异体新西兰白兔骨髓脂肪建立肺脂肪栓塞引起的急性呼吸窘迫的动模模型基础上,观察甲强龙、低分子肝素对ARDS的防治作用。方法:制备骨髓脂肪,将10只健康清洁级成年新西兰白兔处死后,无菌条件下,从四肢长骨骨髓腔内刮取骨髓,收集后使用超细匀浆机分散乳化,初步乳化后再使用超声细胞破碎仪充分破膜,液化的油脂混合物置于4℃低温离心机中以4000r/min离心40 min,取上层透明均一的橙黄色油脂,-80℃保存备用。使用前放置于37℃恒温水浴箱内,融解充分、漩涡仪匀质后使用。选用健康清洁级成年新西兰白兔42只(雌雄不限),兔龄(150+12)d,体重(2.5±0.3)kg,将42只新西兰白兔随机分3组。A组予0.8ml/kg骨髓脂肪,从股静脉以0.05ml/min速度注射。B组在注射骨髓脂肪之前1h及之后12h分别静脉注射1mg/kg甲强龙。C组在注射骨髓脂肪之前3h及之后12h分别皮下注射300U/kg低分子肝素钠。对3组家兔连续观察24h,观察计算死亡率,检测存活家兔动脉血氧分压、二氧化碳分压,血浆游离脂肪酸,于24h结束时做肺组织形态及病理学检查。统计学方法:死亡率以只为单位,作X2检验。血气分析指标PO2、PCO2,游离脂肪酸作t检验,同组间作配对t检验,不同组之间作两样本均数比t检验,采用SPSS13.0软件统计。结果:1死亡率计算比较3组死亡兔均表现为呼吸急促、过度通气、抽搐、死亡,24h内死亡率以A组最高,为8只(57%),B组1只(7.14%),C组6只(42.8%)。3组1小时内共死亡14只,占总死亡率的93.3%。其中A组与B组相比X2检验差异有统计学意义P<0.05,而C组与A组相比X2检验,差异无统计学意义P>0.05。2血液学检查结果(1)动脉血氧分压PO2对比:3组均以注射脂肪后0.5h PO2最低,与注射脂肪前比同组间作配对t检验P<0.01,差异有统计学意义,此后逐渐升高。注射脂肪后0.5h B与A组之间两样本均数比较,t检验P<0.01,差异有统计学意义。注射脂肪后0.5h C与A组之间两样本均数比较,t检验P>0.05,差异无统计学意义。(2)动脉血二氧化碳分压PCO2对比:3组均以注射脂肪后0.5h PO2最低,与注射脂肪前比同组间作配对t检验P<0.01,差异有统计学意义。注射脂肪后0.5h B与A组之间两样本均数比较,t检验P<0.01,差异有统计学意义。注射栓塞后0.5h C与A组之间两样本均数比较,t检验P>0.05,差异无统计学意义。(3)血浆游离脂肪酸(FFA):3组存活家兔血浆游离脂肪酸A、C组注射脂肪厚4h最高,B组注射脂肪后8 h最高,与前比同组间作配对t检验P<0.01,差异有统计学意义。注射脂肪后4h、8h B与A组之间两样本均数比较,t检验P<0.01,差异有统计学意义。注射脂肪后4h C与A组之间两样本均数比较,t检验P>0.05,差异无统计学意义。3组织学检查结果大体肺组织标本检查:3组存活的新西兰白兔经解剖后肉眼观察,双肺有不同程度的弥慢性充血性水肿,呈暗红色,呈肝样变,弹性降低,肺质量增加,切面见组织肿胀,结构松散,切面见浅血性液体渗出。病变程度:A组>C组>B组。肺组织冰冻切片的改良油红O染色:3组存活的新西兰白兔经解剖后,取右肺下叶新西兰白兔的新鲜肺组织行恒温冷冻切片后改良油红0染色,均于肺小血管腔内见橘红色脂肪滴,200倍光镜下经计算脂肪滴数A组>C组>B组。肺石蜡包埋HE染色:3组存活的新西兰白兔经解剖后,取右肺上叶左肺下叶用4%甲醛固定,石蜡包埋后苏木精-伊红(H-E)染色,见栓塞肺毛细血管内皮肿胀,血管壁增厚。肺泡间质水肿,炎性细胞细胞浸润,中性粒细胞为主。部分肺泡壁完整性缺失,基膜断裂,肺泡腔内可见淡粉红色水肿液。病变程度:A组>C组>B组,未栓塞正常兔肺组织H-E正常。肺石蜡包埋马松染色(观察弹性纤维):3组存活的家兔经解剖后,取右肺中叶、左肺上叶新西兰白兔的新鲜肺组织用4%甲醛固定,石蜡包埋后马松染色,见部分栓塞血管周围有弹性纤维断裂现象,但无纤维增多。病变程度:A组>C组>B组,未栓塞正常兔肺组织马松染色正常。结论:1选用新西兰白兔同种异体骨髓脂肪作为栓子可较成功复制符合临床骨折后肺脂肪栓塞引起的ARDS动物模型,更符合骨折后实际发病机制。2甲强龙、低分子肝素对肺脂肪栓塞引起的急性呼吸窘迫综合征有预防治疗作用,前者优于后者。