目的:鳞状上皮化生是发生在眼表疾病的一种常见的病理改变,通过体外空气暴露培养人结膜组织,建立结膜鳞状上皮化生模型,探讨羊膜对人结膜鳞状上皮化生的影响及其作用机制。方法:在体外空气暴露条件下培养人正常结膜组织或人正常结膜组织与羊膜或羊膜提取液共培养4天, 8天或12天,应用K10,MUC5AC,Pax6,Ki67,K14,K16和p63检测结膜上皮细胞的分化和增殖状态,同时对Wnt信号通路相关蛋白β-catenin和phosphor-β-catenin进行免疫染色检测。结果:在体外空气暴露培养条件下,结膜鳞状上皮化生被成功诱导:上皮层次明显增加,K10和K16阳性表达, Ki67、K14和p63表达明显上调,MUC5AC和Pax6表达明显下调或消失。与单独培养的结膜相比,与羊膜共培养的结膜,尽管MUC5AC表达下调,但结膜上皮细胞的异常分化和增殖同时被明显抑制。已发生鳞状上皮化生的结膜与羊膜共培养12天后,结膜上皮几乎被逆转成正常的结膜上皮类型。此外羊膜提出液对结膜鳞状上皮化生的发生同样具有明显抑制作用。在体外空气暴露培养条件下,Wnt信号通路在结膜鳞状上皮化生过程中被明显激活,但在与羊膜共培养的结膜上皮中,Wnt激活信号表达明显下调。结论:体外空气暴露培养结膜组织能成功并稳定地诱导出结膜鳞状上皮化生。羊膜能有效抑制和逆转结膜鳞状上皮化生;羊膜组织中可溶性成分-羊膜提取液也能有效抑制结膜鳞状上皮化生;羊膜抑制结膜鳞状上皮化生可能通过羊膜组织中的可溶性成分发挥作用,同时羊膜抑制结膜鳞状上皮化生可能与其抑制Wnt信号通路的活化相关;这将为结膜鳞状上皮化生性疾病的预防和治疗开辟新的途径。