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第一部分,XN9000血细胞分析仪血小板计数的准确性评价。1)标本保存温度和保存时间对PLT、IPF检测的影响:目的观察不同温度下保存不同时间对网织血小板检测结果的影响。方法抽取20例健康体检者EDTA-K2抗凝静脉血2ml,分别于即时、4℃冰箱保存一天、两天、三天,共4次在XN9000全自动血细胞分析仪上检测IPF;另外,随机抽取20例门诊病人EDTA-K2抗凝静脉血2ml,于室温下每隔2小时检测一次IPF,观察结果的变化情况。结果4℃冰箱保存24小时后,IPF、IPA均值与当天检测均值差异有统计学意义(P=0.003,0.006)。室温保存标本在4小时之内结果稳定。结论EDTA-K2抗凝全血在室温下4小时之内对网织血小板的检测稳定;4℃冰箱保存一天后不适于网织血小板的检测。2)低值血小板计数的准确性评价(与XE2100的比较分析):目的探讨Sysmex XN9000全自动血细胞分析仪的新荧光法(PLT-F)低值血小板计数性能。方法选择50例XE2100的PLT-I法PLT计数低于50×109/L的血常规标本,用Sysmex XN9000全自动血细胞分析仪的“CBC+RET+PLT-F”检测模式进行血小板计数,从精密度、不同仪器间比对、以及与ICSH推荐的参考方法抗CD61抗体的流式细胞术检测结果进行比较等几个方面来评估XN9000的低值PLT计数性能。结果XN9000的新荧光法(PLT-F)与电阻抗法(PLT-I)、光学法(PLT-O)相比,PLT-F的重复性最好,精密度高(CV<4%);虽然3种方法都与流式细胞术的结果显示良好的相关性,但以PLT-F与流式细胞术的CD61分子计数相关性最好(r=0.9636,P<0.0001)。结论XN9000全自动血细胞分析仪新荧光法(PLT-F)对低值血小板计数的精密度高,重复性好,且与参考方法显著正相关,显示其结果准确可信,当用XE2100检测PLT数目较低时,建议用XN9000的PLT-F复查,必要时用流式细胞术检测。第二部分,网织血小板百分比(IPF)和绝对值(IPA)参考区间的建立。1)健康成人网织血小板百分比和绝对值参考区间的建立:目的建立本地区成人的网织血小板百分比(IPF)和绝对值(IPA)的参考区间。方法采用XN9000全自动血液分析仪检测2179名体检者,其中男1138名,女1041名,年龄中位数33(18-92)岁。纳入标准为(1)体格检查:内科、外科、心电图、X线胸部透视、B超检查无明显异常;(2)检验指标:无明显感染症状和贫血表现,白细胞(WBC)<10*109/L;男性血红蛋白(Hb)>120g/L,女性Hb>110g/L;PLT>125×109/L。(3)生化指标结果正常。清晨空腹采集外周血,乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝血2ml,2h内完成检测。数据使用SPSS19.0软件进行统计分析。结果成人IPF的参考区间:(0.7-8.4)%;IPA的参考区间:(2.9~16.9)×109/L;成人PLT计数男、女结果差异有统计学意义(P=0.032);IPF、IPA男女间结果差异无统计学意义(P值分别为0.232,0.511);不同年龄组间IPA和IPF差异有统计学意义(P值分别为0.021,0.010)。结论建立了本地区健康成人的仪器法检测网织血小板绝对值和百分比的参考区间,提高了网织血小板检测的临床应用价值。2)脐带血网织血小板百分比和绝对值参考区间的建立:目的建立新生儿脐带血网织血小板百分比和绝对值的参考区间。方法留取153例足月健康新生儿的脐带血测网织血小板百分比和绝对值。标本为乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝血2ml,2h内完成检测。数据使用SPSS19.0软件进行统计分析。结果脐血IPF参考区间为(0.9-4.8)%,IPA参考区间为(3.1-13.5)×109/L。成人与脐血各参数间差异有统计学意义(PLT,IPF,IPA三个参数的Mann-Whitney U检验,P值均<0.001)。结论在国内首次建立了足月新生儿脐带血的仪器法检测网织血小板绝对值和百分比的参考区间,为网织血小板参数在新生儿血小板减少性疾病中的应用提供参考。第三部分,网织血小板的临床应用研究:1)血小板减少性疾病中的应用:目的探讨网织血小板与血小板参数在血小板减少症患者中的相关性及临床应用价值。方法采集门诊及住院ITP(32例)、AA(40例)、急性白血病血小板减少者(80例)、MDS(20例)静脉血2ml,EDTA-K2抗凝,用sysmex XN9000血细胞分析仪低值血小板专用通道(PLT-F)检测网织血小板(IPF)及血小板相关参数(PLT、PDW、PCT、MPV、P-LCR),与健康对照(544例)比较;用健康组数据分析IPF与血小板其它参数之间的相关性。结果健康组参数间相关分析发现IPF与PLT计数及血小板压积(PCT)负相关(r=-0.427,-0.178);IPF与PDW、MPV、P-LCR均呈正相关(r=0.802,0.782,0.365)。ITP组IPF(13.91±9.22%)明显高于健康对照(4.92±2.46%),差异有统计学意义,P<0.001;AL组IPF(3.91±3.03%)低于健康对照,差异有统计学意义,P〈0.05。AA和AL组的IPA与健康对照比较明显偏低,差异有显著性,P〈0.001。各疾病组的PLT都明显低于健康对照,ITP、AA、AL组P均〈0.001,MDS组P〈0.05。ITP组的平均血小板体积(MPV)大于对照组,而AA组的MPV却小于对照组,各组间的血小板直方图分布宽度(PDW)差异无统计学意义,P均〉0.05。ITP疾病组治疗前后IPF的比较,ITP组治疗后的IPF、MPV显著降低,PLT显著升高(P〈0.05)。IPA治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论血小板减少症患者网织血小板和血小板参数均与正常对照有显著差异,且不同病因的血小板减少症之间也有显著的差异。通过对网织血小板和血小板相关参数的综合分析,可以更好的对血小板减少症进行病因鉴别和疗效评估。2)造血干细胞移植后PLT复活的监测:目的寻找IPF合适的cutoff值用于预测2天后的血小板恢复。方法跟踪29例在本院完成的造血干细胞移植病例,用XN9000全自动血液分析仪定期测定移植后病人外周血中各血小板参数,采用ROC曲线分析29例干细胞移植病例的IPF来界定其cutoff值,用于预测2天后PLT的重建。结果1.全部病例移植后的血小板平均在植后第9.1天(6-12天)降到最低;血小板重建平均出现在移植后第14.7天(10-31天);网织血小板绝对值(IPA)重建平均在植后11.5天(8-24天),网织血小板比率(IPF)重建平均在植后10.3天(8-23天);所有病例在PLT上升前都观察到了IPF、IPA的升高。IPF恢复比PLT早5.1(2-9)天,IPA恢复比PLT早3.9(1-7)天。2.骨髓移植患者(17例):血小板重建平均出现在移植后第15.5天(10-28天);网织血小板绝对值(IPA)重建平均在植后12.2天(9-15天),网织血小板比率(IPF)重建平均在植后11.5天(10-13天)。可见网织血小板百分比的重建比PLT的重建平均约早4天,网织血小板绝对值重建比PLT重建约早3天。3.外周血干细胞移植(11例):(自体移植5例,异体移植6例),血小板重建平均出现在移植后第12天(10-18天);网织血小板绝对值(IPA)重建平均在植后10.6天(8-14天),网织血小板比率(IPF)重建平均在植后9.1天(8-12天)。若再细分可发现自体移植血小板重建11.2(10-13天)要比异体移植13.1(10-18天)更早些。表17。总体上看来外周血干细胞移植的方法比骨髓干细胞移植的方法,血小板及网织血小板恢复的都要早3天左右,且以自体干细胞移植造血重建最早。4.ROC曲线分析得出以3.5%为IPF的cutoff值时,其用于预测2天后PLT重建的敏感性为78%,特异性为89%,阳性预测值为91%。结论1.所有干细胞移植病例可见网织血小板百分比的重建比PLT的重建平均约早4天,网织血小板绝对值重建比PLT重建约早3天。2.通过ROC曲线分析验证IPF的cutoff值为3.5%来预测造血干细胞移植后PLT在IPF上升后2天内的重建。我们通过建立这一cutoff值,预期能帮助临床减少预防性血小板的输注治疗,从而降低输血相关的风险,并且减少病人的经济负担。