【摘 要】
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目的：以基因重组的方法构建人白细胞介素15（hIL-15）基因重组体，并在肝癌细胞BEL-7402中表达，为进一步研究IL-15的功能及临床应用奠定基础。同时将构建好的IL-15真核表达质粒与HBsAg核酸疫苗共同免疫Babl／c小鼠，以观察其对小鼠免疫应答的影响。 方法：依据Genbank中人白细胞介素15cDNA的序列，结合表达载体的特点，设计、合成一对IL-15基因序列特异性引物，从正
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目的：以基因重组的方法构建人白细胞介素15（hIL-15）基因重组体，并在肝癌细胞BEL-7402中表达，为进一步研究IL-15的功能及临床应用奠定基础。同时将构建好的IL-15真核表达质粒与HBsAg核酸疫苗共同免疫Babl／c小鼠，以观察其对小鼠免疫应答的影响。 方法：依据Genbank中人白细胞介素15cDNA的序列，结合表达载体的特点，设计、合成一对IL-15基因序列特异性引物，从正常人外周血单个核细胞中抽提总RNA作模板，通过RT-PCR扩增得到人成熟IL-15的cDNA片段，然后将IL-15cDNA克隆入pGEM-T Easy Vector中，形成中介重组体PGEM-IL-15，经酶切鉴定和测序分析后，再亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1hisB上，构建人IL-15的真核表达载体pcDNA3.1hisB-IL-15。通过脂质体法转染至BEL-7402细胞，G418加压筛选，建立真核表达细胞株，ELISA法检测细胞培养上清IL-15蛋白含量，用IL-15依赖细胞株CTLL-2细胞及MTT法检测rhIL-15生物学活性。 同时，单以HBsAg核酸疫苗pcDNA3.1（+）-S或联合上述pcDNA3.1hisB-IL-15质粒注射Babl／c小鼠股四头肌，6周后，ELISA法检测小鼠血清抗-HBs及小鼠脾细胞经ConA刺激后分泌细胞因子IL4及rN－Y的水平，MH法检测小鼠淋巴细胞增殖反应，LDH法检测小鼠脾细胞NK及CTL的杀伤活性。 结果：pCDNA3．lhiSB二L寸5经ECOR、BaITirll双酶切后可获得500hp左右的特异性条带，测序结果与己报道的 hIL45 CDNA序列一致。脂质体转染后获得6个BEL刁402细胞阳性克隆，RTFCR证实有LJ 的转录，ELISA法检测细胞培养上清o刁 蛋白含量为 2．86土0．613 ＂g／ml，IL－15活性测定为 156－252 U／（m．10‘cell）。 单注射 pCDNA3二什卜 S及共注射 pCDNA3．lhiSB二L4 质粒的小鼠血清灼0mA值分别为1．89士0．62及1．37上0．58。NK杀伤活性分别为30．04土2．gi及44．56土5．69，两组有显著性差异。特异性C几活性联用 PCDNA3二 hiSB二L八5质粒组较单用 pCDNA3．l什＞S组明显升高 中功．05人脾细胞上清液中rN－Y水平显著升高仔＜0．05人IL4水平差异无显著性①＞0刀5)，HBSAg作用后脾细胞刺激指数SI值亦升高01刀5)且呈剂量依赖性。 结论：成功地构建了真核表达载体 pCDNA3二 hiSB二L八；首次将IL刁 转导入 BEL刁402肝癌细胞中并可表达出有生物活性的IL－15：首次将 pCDNA3二 hiSB－IL－15质粒联合 HBSAg核酸疫苗免疫小鼠，表明 IL八 5质粒可增强小鼠的细胞免疫功能。
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