【摘 要】
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口服胰岛特异的自身抗原可诱导免疫耐受,防止自发性自身免疫糖尿病的发生。为使胰岛素蛋白更有效地被肠相关淋巴组织吸收,本研究分别构建了强免疫佐剂霍乱毒素B亚单位(choler
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口服胰岛特异的自身抗原可诱导免疫耐受,防止自发性自身免疫糖尿病的发生。为使胰岛素蛋白更有效地被肠相关淋巴组织吸收,本研究分别构建了强免疫佐剂霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit, CTB)与胰岛素原(proinsulin, PROIN)和胰岛素B链(insulin B chian, INSB)的融合基因CTB-PROIN、CTB-INSB,探索了利用马铃薯生产1型糖尿病口服疫苗的可能性,主要研究内容和结果如下: 1.首先将融合基因CTB-PROIN、CTB-INSB克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,并诱导其表达。大肠杆菌表达的融合蛋白CTB-PROIN和CTB-INSB可与GM1糖苷脂结合,并具备CTB和胰岛素的双重抗原性。 2.在此基础上,分别构建了含有土豆块茎特异性启动子Patatin、融合基因、马铃薯蛋白酶抑制剂基因Ⅱ(Pin2)的3’末端非翻译区(UTR)序列和NOS终止子的两个植物转化载体,通过农杆菌介导法转化马铃薯,并获得含有融合基因的转基因马铃薯植株。转基因植物表达的融合蛋白具有霍乱毒素和胰岛素的双重抗原性,可于神经节苷脂GM1结合,具有潜在的生物活性。这为利用转基因马铃薯免疫NOD小鼠,进一步分析其免疫特性奠定了基础。
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