淋巴瘤是来源于淋巴组织的恶性肿瘤,根据肿瘤细胞来源主要分为B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤(T cell lymphoma, TCL)。近年来,其发病率和死亡率逐年增加。随着分子生物学研究的进展,特别是酪氨酸激酶抑制剂、CD20单抗等靶向治疗药物广泛应用于临床,B细胞来源的白血病、淋巴瘤的预后得到了明显的改善。而T细胞白血病／淋巴瘤的生物学行为、临床特点具有高度异质性,其发病机制尚未完全清楚,以CHOP、ESHAP为基础的常规化疗方案治疗反应不佳,缺少有效的分子生物学靶向治疗药物,难治、复发病例多见,预后极差。因此需要对T细胞淋巴瘤／白血病的发病的分子机制、增殖、代谢的特点进行深入研究,以期为T细胞恶性肿瘤的靶向治疗寻找新的方向。葡萄糖是维持机体内环境稳定的主要能源物质。肿瘤细胞的增殖速度和能量消耗均明显高于正常细胞。干扰葡萄糖摄取将会影响肿瘤细胞的增殖、代谢、侵袭能力,从而影响疾病进展,改善疾病预后。葡萄糖转运蛋白(glucose transporters,Gluts)是介导哺乳动物细胞糖转运的主要载体。主要包括三类：第一类：Glut1-lut4,主要转运葡萄糖；第二类：Glut5, Glut7, Glut9,lut11,主要转运果糖；第三类：Glut6, Glut8, Glut10, Glut 12和HMIT等,功能尚不明确。在胰腺癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、鼻咽癌等肿瘤中Glut1的表达均出现异常增多。在原发胃的淋巴瘤中(病理类型包括弥漫大B细胞淋巴瘤和粘膜相关淋巴组织淋巴瘤),肿瘤组织表达Glut1水平与PET/CT中肿瘤摄取18FDG的SUV值明显相关。瘦素(leptin)是一种由肥胖基因(OB)编码的多肽类激素,主要由脂肪组织分泌,由146个氨基酸构成,其结构与人粒细胞刺激因子以及白介素6相似。瘦素受体(ObR)属于I类受体家族,在人体内存在广泛的生物学效应。瘦素与其受体(ObR)结合,通过JAK/STAT、PI3K/Akt和MAPK信号通路参与摄食和能量消耗、细胞增殖及凋亡以及炎症反应等多种病理生理过程。近年来已有大量的研究证实瘦素在多种恶性肿瘤的发生、发展过程中起重要作用。在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymophoma, DLBCL)中,ObR的表达明显高于反应性增生的淋巴结组织；并且瘦素通过激活P13K/AKT信号通路促进DLBCL细胞增殖、抑制凋亡。瘦素对机体葡萄糖代谢的影响主要是通过作用于中枢神经系统和周围组织两个水平实现的。在中枢神经系统,瘦素作用于下丘脑神经元,(如：葡萄糖兴奋性神经元和葡萄糖抑制性神经元)激活细胞内的P13K信号通路,进而调节葡萄糖代谢。在周围组织,瘦素主要作用于代谢相关细胞,如胰岛细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。此外,近年来瘦素对免疫细胞,特别是活化T细胞葡萄糖代谢的影响也逐渐引起了研究者的重视。但瘦素对恶性肿瘤细胞糖代谢的作用目前仅见报道于乳腺癌细胞：高糖能促进乳腺癌细胞表达ObR,激活瘦素信号通路,促进其对葡萄糖的生物利用。在T细胞淋巴瘤中,瘦素对TCL细胞葡萄糖代谢和细胞增殖的作用尚未有相关研究报道,而瘦素信号通路对TCL预后的意义还不清楚。为此,我们进行了以下两部分实验：1、研究不同浓度的瘦素干预下,T细胞淋巴瘤／白血病细胞Molt-3增殖能力和葡萄糖摄取能力的变化。经过瘦素干预后,通过提取细胞膜蛋白和Western blot法测定葡萄糖转运体Glut1向细胞膜转运情况的变化；通过RT-PCR和Western blot法检测Glut1在mRNA和蛋白水平表达情况的变化。2、收集T细胞淋巴瘤病例的临床资料,采用免疫组织化学法检测ObR和Glut1在T细胞淋巴瘤组织和反应性增生的淋巴组织中的表达情况。并对上述两个指标与临床特点、疾病预后的相关性进行分析。第一部分瘦素及其受体对T淋巴瘤细胞Molt-3葡萄糖摄取的影响及其机制的探讨目的：葡萄糖是维持细胞生长的主要能源物质。与正常细胞相比,肿瘤细胞具有增殖活跃,生长迅速,能量需求大的特点。葡萄糖代谢不仅参与肿瘤细胞增殖和凋亡的过程,还影响肿瘤预后。在急性淋巴细胞白血病中,葡萄糖代谢的抑制可以使肿瘤细胞对糖皮质激素的杀伤作用更加敏感。瘦素(leptin)是一种蛋白质类激素,由OB基因编码,其结构与生长激素、粒细胞刺激因子等相似。主要由脂肪细胞分泌,一直以来被认为是调节机体葡萄糖代谢的重要物质。在中枢神经系统,它通过与下丘脑部位相应受体的结合,参与机体对食物摄入、能量消耗、脂肪代谢等的调节作用,维持葡萄糖稳态。在周围组织中,瘦素-瘦素受体-葡萄糖转运蛋白通路能直接作用于组织细胞,为细胞摄取利用葡萄糖的重要通路。但目前人们对瘦素在肿瘤细胞糖代谢中的作用还知之甚少。本研究选择了人T细胞淋巴瘤细胞株Molt-3,研究瘦素及其受体对其葡萄糖代谢的影响,并探讨其作用方式。材料和方法：1.TCL细胞株Molt-3与重组人瘦素共培养2.CCK-8测定细胞增殖3. 葡萄糖检测试剂盒检测细胞内葡萄糖浓度4.提取RNA,进行实时定量PCR5.膜蛋白、总蛋白提取以及蛋白印迹分析6.ObR特异性siRNA质粒转染Molt-3细胞,测定转染后细胞内葡萄糖浓度的变化,Western blot法测定转染后ObR、Gluts蛋白水平的变化7.统计学分析结果：1.CCK-8结果显示：随着瘦素作用时间的延长和瘦素浓度的增加,Molt-3细胞活性逐渐增加。其差异均有统计学意义。2. 对细胞内葡萄糖浓度测定结果显示：在瘦素作用30mmin后,Molt-3细胞内葡萄糖浓度以浓度依赖的方式增加；在瘦素作用48h后,Molt-3细胞内葡萄糖浓度增加,其差异均具有统计学意义。3. Western blot结果显示：与对照组比较,100ng/ml瘦素与Molt-3细胞共孵育30min后细胞膜蛋白中Glut1的表达水平最高,与细胞内葡萄糖浓度的变化一致(P<0.05)。4. RT-PCR与Western blot结果分别证实在瘦素作用48h后,Molt-3细胞中Glut1的mRNA和蛋白表达水平均上调,而ObR和Glut4表达无明显变化。5.ObR特异性siRNA质粒阻断瘦素信号通路后,ObR、Glut1蛋白表达水平下调,细胞内葡萄糖水平明显下降。结论：1.瘦素促进TCL细胞Molt-3细胞增殖。2.瘦素促进Molt-3细胞摄取葡萄糖。3.瘦素对Molt-3细胞糖代谢的影响可能是通过上调Glut1的表达以及促进Glut1募集固定于细胞膜而实现的。第二部分T细胞淋巴瘤中ObR和Glut1的表达情况及临床意义目的：T细胞淋巴瘤／白血病是一组来源于T淋巴细胞的恶性肿瘤,在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)中占10-15%,在亚洲国家的发病率高于西方国家。与B细胞来源的肿瘤相比,T细胞淋巴瘤／白血病病情进展快,对常规化疗的反应率不高,缺少靶向治疗药物,预后差,因此,研究T细胞恶性肿瘤的生物学特点,以期找寻新的治疗策略非常必要。瘦素参与肿瘤细胞的增殖和代谢过程,而其在T细胞淋巴瘤中的临床意义尚不清楚。本研究收集T细胞淋巴瘤患者的临床资料、病理标本,研究瘦素受体ObR和葡萄糖转运体Glut1在T细胞淋巴瘤组织中的表达情况及其临床意义。材料和方法：1.收集T细胞淋巴瘤患者临床资料。2.免疫组化的方法检测手术切除的T细胞淋巴瘤和反应性增生的淋巴组织中CbR、Glut1、Glut4的表达情况。3. Fisher确切概率法分析ObR与其他临床、病理指标的相关性。4.Cox回归法分析ObR与T细胞淋巴瘤的预后相关性。结果：1.共收集T细胞淋巴瘤病例36例。其中：外周T细胞淋巴瘤(非特指型)12例,NK/T细胞淋巴瘤8例,血管免疫母T细胞淋巴瘤3例,T免疫母细胞淋巴瘤3例,T淋巴母细胞淋巴瘤4例,间变性大细胞T细胞淋巴瘤6例。中位年龄62岁、中位生存期16.5个月,3年生存率14.0%。2.T细胞淋巴瘤组织中ObR和Glut1的表达率高于反应性增生的淋巴结组织(58.3% vs 22.2%, P=0.012),而Glut4在二者中的表达情况无统计学差异。3.ObR的表达情况与与Glut1表达存在相关性(P=0.007),与Glut4表达不相关(P=0.292),并且与患者的年龄、性别、分期、LDH水平、B症状、合并糖尿病等亦不相关。4.单因素分析显示：年龄大于60岁以及共同表达ObR、Glut1者预后不良,多因素分析提示：共同表达ObR、Glut1为影响T细胞淋巴瘤预后的独立危险因素(HR=3.420,95%CI 1.293-9.049, P=0.013)结论：1.ObR和Glut1在T细胞淋巴瘤组织中的表达高于反应性增生的淋巴结组织。2.在细胞淋巴瘤组织中ObR和Glut1的表达存在相关性。3.T细胞淋巴瘤预后差,在T细胞淋巴瘤中,共同表达ObR和Glut1为独立的不良预后因素。