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第一部分：人TRAP1基因的克隆目的：1．构建人TRAP1重组表达载体，并原核表达重组人TRAP1蛋白。2．对重组菌的诱导表达条件进行优化，使重组蛋白TRAP1的表达量最高。方法：1．应用RT-PCR技术，从K562/ADR细胞株中扩增出TRAP1基因的cDNA。选择NdeⅠ和XhoⅠ分别作为上下游引物的酶切位点，将TRAP1基因连接到pET28a(+)载体上，重组载体pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆菌BL21(DE3)中用于表达重组蛋白TRAP1。2．通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间，SDS-PAGE检测重组蛋白TRAP1的表达量，找出最佳诱导条件，使重组蛋白TRAP1表达量最高。结果：1．成功构建了pET28a(+)-TRAP1重组载体，转化BL21(DE3)后，成功表达了重组蛋白，通过Western Blot鉴定了表达的重组蛋白即为人TRAP1蛋白。2．重组菌BL21-pET28a(+)-TRAP1表达重组蛋白TRAP1的最佳诱导条件为：39℃下，OD600达到0.8时，经终浓度为0.1mmol/L的IPTG诱导6h。第二部分：TrxR抑制剂IG3诱导宫颈癌细胞死亡的机制研究目的：初步探讨TrxR抑制剂IG3诱导宫颈癌细胞株CaSki和SiHa死亡的机制。方法：IG3作用后，采用了MTT法检测了IG3对CaSki和SiHa细胞株体外增殖的抑制作用，并分别采用AnnexinV/PI双染-流式检测法、PI单染-流式检测法、DCFH-DA荧光探针法、JC-1染色-流式检测法、Western Blot法以及人凋亡抗体蛋白芯片，分别检测了IG3作用后，对CaSki和SiHa细胞凋亡、细胞周期、细胞内ROS水平、线粒体膜电位、TrxR蛋白以及凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果：IG3以时间依赖性和浓度依赖性抑制CaSki和SiHa细胞的体外增殖，以浓度依赖性诱导CaSki和SiHa细胞发生S期阻滞，引起细胞坏死，并能显著升高细胞内ROS水平，以时间依赖性降低CaSki和SiHa细胞线粒体膜电位，而对细胞凋亡相关蛋白和TrxR的表达无影响。