eRF3b-36片段对化学诱导的小鼠肝癌的抑制作用及其机制研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangxizi
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目的:研究eRF3b-36片段对化学诱导的小鼠肝癌的抑制作用,并对其作用机制进行初步探讨。  方法:将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、eRF3b-36片段 150、250μg/kg 组,每组 10 只。除正常组外,其余三组均给予DEN+CCL4+乙醇联合诱导肝癌,持续20周;从给予造模因素前一天开始,eRF3b-36片段150、250μg/kg组分别经尾静脉注射相应剂量的eRF3b-36片段,2次/周,持续20周。第20周末处死所有小鼠,收集血清用于测定小鼠肝功能;摘取小鼠肝脏,记录小鼠肝脏肿瘤发生发展情况;通过HE及天狼星红染色观察小鼠肝组织病理学改变;应用 qRT-PCR 方法测定小鼠肝组织内肝癌标志物 AFP、GPC3,细胞增殖相关因子 Ki-67、Myc、Cyclin D1、Cyclin E1,炎症相关因子TNF-α、TGF-β1的mRNA表达水平。计量资料以均数±标准差表示,采用单因素方差分析或秩和检验进行多组间比较,P<0.05时差异有统计学意义。  结果:  1. 肝功能指标:血清 ALT 及 AST 水平在正常组(40.90±11.64,126.90±25.64 )、eRF3b-36 片段 250μg/kg 组(3360.00±1593.88,2333.75±1057.61 ) 中 均 显 著 低 于 模 型 组 (5157.50±1531.93,3751.25±886.40)(P<0.05)。  2. 肝脏肿瘤发生发展情况:除正常组外,其余三组小鼠肝脏均有肿瘤形成,并且肿瘤数目在eRF3b-36片段150μg/kg组(3.38±1.77)、250μg/kg组(2.88±1.96)中均显著低于模型组(5.38±2.00)(P<0.05)。  3. 肝组织病理学改变:HE染色结果显示,正常组小鼠肝组织镜下未见病变;模型组小鼠肝组织镜下可见肝癌病变并且细胞异型性明显;同模型组相比,eRF3b-36片段150、250μg/kg组细胞异型性较小。天狼星红染色结果显示,正常组小鼠肝组织无纤维化;模型组小鼠肝组织发生明显的纤维化;同模型组相比,eRF3b-36片段150、250μg/kg组肝组织纤维化程度明显减轻。  4.肝癌标志物mRNA表达水平:AFP mRNA相对表达量在正常组(1.00±0.12)、eRF3b-36 片段 250μg/kg 组(8.63±3.11)中均显著低于模型组(97.33±89.91)(P<0.01)。GPC3 mRNA相对表达量在正常组(1.00±0.40)、eRF3b-36 片段 150μg/kg 组(22.10±6.33)、250μg/kg 组(17.77±9.87)中均显著低于模型组(297.11±256.79)(P<0.01)。  5.细胞增殖相关因子mRNA表达水平:Ki-67、Myc、Cyclin D1 mRNA相对表达量在正常组(1.00±0.32,1.00±0.44,1.00±0.22)、eRF3b-36片段250μg/kg 组(3.23±0.62,5.44±1.15,6.95±3.05 )中均显著低于模型组(5.01±1.23,15.27±4.10,11.30±1.03)(P<0.05)。Cyclin E1 mRNA相对表达量在正常组(1.00±0.40)、eRF3b-36片段150μg/kg组(8.51±2.57)、250μg/kg组(3.47±1.55)中均显著低于模型组(15.00±5.20)(P<0.05)。  6. 炎症相关因子mRNA表达水平:TNF-αmRNA相对表达量在正常组(1.00±0.27)、eRF3b-36 片段 250μg/kg 组(3.45±1.05)中均显著低于模型组(5.87±0.99)(P<0.01)。TGF-β1 mRNA相对表达量在正常组(1.00±0.16 )、eRF3b-36 片段 150μg/kg 组(1.72±0.34 )、250μg/kg 组(1.63±0.52)中均显著低于模型组(2.68±0.74)(P<0.05)。  结论:  1. eRF3b-36片段对化学诱导的小鼠肝癌具有抑制作用,主要表现在保护肝功能,降低肝脏肿瘤数目,改善肝组织病理学改变,降低肝癌标志物AFP、GPC3的表达等方面。  2. eRF3b-36片段抑制化学诱导的小鼠肝癌的机制可能与其下调细胞增殖与炎症相关因子Ki-67、Myc、Cyclin D1、Cyclin E1、TNF-α、TGF-β1的表达有关。
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