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肿瘤尤其恶性肿瘤是威胁人类生命并且极难治愈的一种疾病。肿瘤的防治成为全球亟待解决的问题,也是医学领域研究的重点。鉴于传统治疗方法如手术、放疗、化疗等存在的不足,细胞免疫治疗等肿瘤生物治疗成为肿瘤治疗的研究的热点。过继免疫疗法作为极具潜力的一种生物治疗手段备受关注,并且已经应用于临床。但研究发现其仍存在问题:疗效受限于肿瘤免疫抑制性微环境。如何打破肿瘤局部的免疫抑制性微环境已成为肿瘤免疫治疗的关键问题。免疫耐受性DC细胞参与肿瘤免疫耐受,在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。我们前期研究发现IL-12可以使免疫耐受性DC细胞产生抗肿瘤免疫反应,但作用机制尚不清楚。本文利用免疫抑制因子IL-10和TGF-β体外诱导免疫耐受性DC细胞,建立免疫耐受表型DC细胞模型,并通过DC细胞表面分子的流式检测、qRT-PCR、Western blot、混合淋巴细胞增殖反应实验验证该细胞模型的正确性。此外,我们利用PCR、T4连接、同源重组等分子克隆技术构建表达IL-12的腺病毒,并且通过流式分析和ELISA检测腺病毒的有效性。我们也通过流式细胞检测、混合淋巴细胞增殖反应实验、肿瘤细胞杀伤实验、qRT-PCR、Western Blot等方法检测IL-12对免疫耐受性DC细胞的作用并明确其部分分子机制。进行上述研究的同时,我们还探讨了miR-125b对肝癌干细胞的自我更新能力的调控作用。通过课题组的前期研究基础,我们流式分选得到肝癌干细胞以及构建了表达mi R-125b的慢病毒感染肝癌干细胞。通过成球能力、克隆形成能力、增殖能力、凋亡及迁移能力这几方面的检测来研究miR-125b对肝癌干细胞的作用。综上所述,本文得出了一些结论如下:1.证实了通过IL-10、TGF-β诱导免疫耐受性DC细胞方法是可行的,而且这种免疫耐受性DC细胞可用于以后的实验研究。2.成功构建了表达IL-12的腺病毒,可分泌较高浓度的IL-12。3.证明了IL-12可以改变免疫耐受性DC细胞的生物学特性,使其发挥相应的免疫效应作用,初步阐释了其部分作用机制。4.说明了mi R-125b对肝癌干细胞的自我更新能力具有负向调控作用。本研究对局部改善肿瘤微环境的方法进行了初步的探讨,构建表达IL-12的腺病毒,为针对肿瘤微环境开辟治疗新策略提供很好的提示意义,也为肿瘤生物治疗的后续改进和临床应用提供实验数据,同时也为miR-125b联合免疫细胞靶向肝癌干细胞治疗提供了实验基础,具有一定的理论意义和应用价值。