目的:克隆干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)启动子并寻找其核心功能区域,进一步鉴定与STING基因启动子核心功能区域结合的转录因子,为揭示STING基因的表达调控机制奠定基础。方法:以从HEK 293细胞抽提的基因组DNA为模板,进行PCR扩增获取STING转录起始位点上游的启动子区序列,将此插入无启动子活性的pGL3-Basic载体的多克隆位点,构建成重组报告质粒。转染HEK 293细胞,运用双萤光素酶报告基因检测系统测其萤光素酶活性,计算相对活性单位(RLU)来鉴定其启动子活性。利用缺失分析法对STING基因5’端进行逐段缺失,克隆后得到多个截短片段,插入到基本载体pGL3-Basic上,转染细胞后检测各截断片段的双萤光素酶活性,比较RLU后定位STING基因启动子的核心功能区域。利用点突变技术、染色质免疫沉淀(ChIP)、RNA干扰和基因过表达等实验,分析STING启动子区的转录因子对其启动子活性的影响。结果:经双酶切、基因测序鉴定,成功构建了含有STING启动子区序列的双报告质粒。进行萤光素酶活性分析后,与基本载体pGL3-Basic活性比较,发现STING启动子在HEK 293细胞中表现出很明显的活性。分析STING基因5’端缺失的截短片段的启动子活性后发现,STING基因的核心启动子区域位于-124～+1 bp之间。利用生物信息学方法分析STING启动子区域包含了 GATA-1、Sp1、E2F、HOX、CREB、c-Myc和SRY等转录因子结合位点,点突变实验结果表明转录因子CREB和c-Myc结合位点维持了 STING的基本转录活性。ChIP实验结果表明转录因子CREB和c-Myc与STING的启动子区有结合。RNA干扰和基因过表达实验表明CREB和c-Myc对STING的启动子活性具有促进作用。结论:克隆得到的STING基因启动子的双报告质粒具有很强的启动子活性,其核心启动子区域位于转录起始位点上游-124至+1 bp处,转录因子CREB和c-Myc正调控STING的启动子活性。