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桦褐孔菌作为一种著名的药用真菌,具有重要的研究价值。现代医学和药理学很多研究表明,桦褐孔菌在抗肿瘤、抗氧化和降血糖等生物活性方面具有重要的作用,并认为桦褐孔菌中的主要功效成分为桦褐孔菌多糖。但目前国内外研究者对桦褐孔菌多糖的研究仍处于起步阶段,关于桦褐孔菌多糖对结肠癌细胞的抗增殖作用也鲜有报道。因此本课题从桦褐孔菌多糖出发,在乙醇分级沉淀和超滤膜分级纯化的基础上,初步研究了桦褐孔菌多糖对结肠癌HT-29细胞的抗增殖作用及其机制,以期为桦褐孔菌多糖的开发和临床应用提供理论依据。本研究通过乙醇分级沉淀法对桦褐孔菌粗多糖进行分级纯化,得到6种不同溶解度的分级多糖,分别命名为IOP40、IOP50、IOP60、IOP70、IOP80和IOP90。对桦褐孔菌不同分级多糖的理化性质及其抗癌活性进行了研究,结果表明IOP40组分的多糖含量最高,IOP60的多糖得率、蛋白质含量和糖醛酸含量均为最高。6种分级多糖均可显著抑制结肠癌HT-29细胞增殖(P<0.05),并呈时间和剂量依赖性。当剂量和作用时间一致时,分级多糖对结肠癌HT-29细胞抑制率大小依次为:IOP60>IOP80>IOP90>IOP70>IOP50>IOP40,其中IOP60对HT-29细胞的抑制作用最强。采用不同的方法分别对IOP60进行除色素和脱蛋白处理,发现活性炭为桦褐孔菌多糖IOP60的理想脱色剂。通过高碘酸-Schiff试剂染色法鉴定得出,IOP60是一种糖蛋白。IOP60经超滤膜分级得到5种不同分子量的多糖组分IOP60a、IOP60b、IOP60c、IOP60d和IOP60e,其中分子量在10 k Da-30 k Da范围内的IOP60b多糖组分所占比例最大,对结肠癌HT-29细胞的抑癌作用最好。通过苯酚硫酸法测得其多糖含量为75.69%。经HPLC法测得IOP60b由L-阿拉伯糖、D-核糖、D-木糖、D-半乳糖、D-葡萄糖和D-甘露糖等单糖组成,其摩尔比为12.33:14.05:1.29:21.49:26.06:36.05。另外,本课题较为系统地研究了IOP60b对结肠癌HT-29细胞的体外抗增殖作用及其机制。通过光学显微镜观察、Hoechst 33258荧光染色和苏木精-伊红染色等形态观察,发现经IOP60b作用后的HT-29细胞形态均发生明显的变化;DNA ladder试验、PI-Annexin V染色试验和细胞周期分析结果表明,IOP60b可显著诱导HT-29细胞凋亡,并将细胞周期阻滞于G0/G1期;流式细胞术检测结果显示,IOP60b作用HT-29细胞后导致其线粒体跨膜电位降低。最后,通过RT-PCR技术和Western blot试验分别从基因和蛋白水平分析了可能触发线粒体凋亡分子事件的蛋白基因Bax、Bcl-2和Caspase-3,结果发现Bax、Caspase-3表达上调而Bcl-2表达下调,说明Bcl-2家族和Caspase家族均参与了细胞凋亡调控过程,IOP60b诱导HT-29细胞凋亡作用机制可能是通过线粒体途径实现的。