紫色光合菌LHIpufBA突变体的研究

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Thermochromatium(Tch.)tepidum光合作用单位由捕光色素蛋白复合体Ⅰ(light-harvestingⅠ,LHⅠ)、捕光色素蛋白复合体Ⅱ(Iight-harvestingⅡ,LHⅡ)和光反应中心RC(Reaction Center)组成。研究发现,Tch.tepidum LHⅠ-Qy特征吸收峰是在915nm处,与其它的光合作用细菌约880nm处相比较,在长波长方面存在35nm的红移,红移的原因尚不清楚。  本研究利用分子生物学和光谱分析的方法,体外克隆Tch.tepidum pufBA序列,并对该序列进行丙氨酸定点突变,将突变后的pufBA序列构建于pRK404重组表达载体上(含Rhodobacter sphaeroide pufQ、pufK、pufL、pufM、pufX),通过接合转移把表达质粒导入Rhodobacter(Rb.)sphaeroides变异株RbsΔQ-X(基因组缺失pufQ-X)中,并对突变接合子的最佳培养条件和四环素抗性浓度进行优化,分析其表达特性。  结果表明:突变的Tch.tepidum pufBA在Rb.sphaeroides中能够正常表达,但其表达量较低;光谱吸收表明突变接合子的菌液在896nm附近有特征吸收峰;突变接合子的最佳四环素抗性浓度为20μg/mL,较好的培养条件为24℃、90rpm、兼性厌氧、弱光,目前还在进一步探索突变接合子的最佳培养条件。Tch.tepidum LHⅠ异源蛋白的正常表达,有助于其晶体结构的研究,同时为进一步进行体外多位点突变其它功能蛋白提供了一定的实验数据。
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