基于量子点的比率荧光法检测酪氨酸酶活性及筛选其抑制剂的研究

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由于荧光分析法具有高灵敏度、强选择性以及操作简单、成本较低等优点,很好地满足了分析检测新技术的要求。近几年,在化学与生物传感、生物成像和医疗诊断等领域得到了非常广泛的应用。同时,量子点因其具备良好的生物相容性、优异的光学性能成为生物医学领域备受期待的新一代荧光标记物,并成为荧光分析方法的研究热点。第1章:绪论首先,对荧光现象的产生、荧光分析方法的分类以及应用进行了简单介绍;其次,简要论述了量子点的概念、性质、发光原理、制备方法以及在不同领域的应用;然后叙述了荧光分析方法检测酪氨酸酶活性的研究现状;最后,介绍了本论文的研究意义和研究内容。第2章:基于CdTe量子点的比率荧光探针检测酪氨酸酶活性酪氨酸酶(TYR)是一种典型的多酚氧化酶,是一种双核含铜的酚氧化酶,常见于动物、植物和真菌中。白瘢风和黑色素瘤通常由TYR的非正常表达引起。此外,TYR失衡还伴有帕金森病等神经系统疾病。因此,监测TYR水平对于相关疾病的早期诊断具有重要意义。开发一种检测TYR活性的方法对临床诊断具有重要价值。本研究合成了 3-巯基丙酸(MPA)稳定的CdTe量子点(MPA-CdTe QDs),酪氨酸酶的底物双酚A被催化氧化生成醌类物质,通过光电子转移效应,量子点的荧光会减弱,再引入以ZnS为壳层的水溶性ZnCdS/ZnS量子点作为荧光参比信号,构建了用于TYR检测的比率量子点荧光探针。该比率荧光探针检测TYR的线性范围为0-1 U/mL(R2=0.9928),检出限为 0.1 U/mL(S/N=3)。第3章:基于3-氨基苯硼酸功能化量子点的比率荧光探针用于酪氨酸酶活性的高灵敏度检测为进一步提高检测灵敏度,增强检测方法的使用价值,以6-羟基香豆素(6-HC)为底物,建立了基于3-氨基苯硼酸功能化量子点(APBA-QDs)的双发射比率荧光探针,用于检测酪氨酸酶活性。TYR可以催化单羟基化合物6-HC形成一种强荧光的邻羟基产物,6,7-二羟基香豆素。APBA-QDs与6,7-二羟基香豆素通过邻羟基与硼酸基团间特殊的共价结合而形成五元环酯,量子点荧光减弱。随着TYR浓度的增加,源自QDs的675 nm处的荧光逐渐减弱,而6,7-二羟基香豆素引起465 nm处的荧光增强。通过测量双发射探针在675 nm处的减弱信号以及在465 nm处的增强信号,建立了比率荧光探针检测TYR活性的新方法。采用响应曲面法对实验条件进行了优化,在优化条件下,该方法检测TYR的线性范围为0-0.05 U/mL(R2=0.9952),检出限低至0.003 U/mL(S/N=3)。将所建方法成功地应用于细胞提取物及人血清等实际样品中TYR的活性分析;同时将其应用于TYR抑制剂的快速筛选,也得到了令人满意的结果。实验结果证明所构建的荧光探针检测TYR活性不仅具有较高的灵敏度,也有优异的选择性,有望在检测实际样品中TYR活性和抑制剂的筛选等方面得到广泛应用。
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