本文应用荧光相图法研究了脲、盐酸胍和pH诱导猪胃蛋白酶变性过程及其复性过程的路径,捕捉蛋白变性、复性过程中存在的部分折叠中间态;应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测了在脲变性胃蛋白酶复性过程中并未形成聚集体及其原因。本研究结果为探索一个统一的蛋白质折叠机理提供了有益的帮助。猪胃蛋白酶变性过程的荧光光谱表明,在激发波长为280nm时,以脲作为诱导剂诱导猪胃蛋白酶分子去折叠时,其分子中色氨酸的最大发射峰不发生位移;而以盐酸胍作为诱导剂诱导猪胃蛋白酶去折叠时,其分子中色氨酸的最大发射波长发生红移,色氨酸荧光强度下降,且其分子中酪氨酸的特征峰显现。猪胃蛋白酶变性过程的荧光相图法检测结果表明:脲作为变性剂时,无论有没有还原剂2-巯基乙醇存在,猪胃蛋白酶的去折叠过程是从天然态直接转变为去折叠态,其间不形成部分折叠中间态,即符合“二态模型”;盐酸胍诱导的猪胃蛋白酶的去折叠过程中,无论变性体系中有没有还原剂2-巯基乙醇存在,该蛋白从天然态转变为部分折叠中间态,并最终转变为去折叠态,即符合“三态模型”。变性猪胃蛋白酶复性过程的荧光相图法检测结果表明:脲变性猪胃蛋白酶的复性过程没有中间体的出现,符合“二态模型”,盐酸胍变性猪胃蛋白酶的复性过程出现了一个部分折叠中间体,符合“三态模型”。猪胃蛋白酶pH变性过程的荧光相图法检测结果表明:当缓冲液的pH发生变化时,胃蛋白酶经历了一个由天然态到中间态1、中间态2,再到去折叠态的过程,符合“四态模型”。SDS-聚丙烯酰胺电泳研究脲变性猪胃蛋白酶的稀释复性的结果显示,在稀释复性的过程中没有聚集体形成。