乐陵枣叶总黄酮的提取、分离纯化、鉴定及其抗氧化活性研究

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乐陵小枣,产地为山东德州乐陵,种植面积广,具有悠久的栽培历史。许多研究表明黄酮类化合物具有抗氧化,抗炎,治疗心血管疾病等保健功能。本文以乐陵枣叶为原料,采用乙醇回流法提取枣叶中总黄酮,采用正交实验优化提取工艺,利用大孔树脂分离纯化枣叶总黄酮,利用液相色谱-质谱联用法鉴定枣叶总黄酮,并对枣叶总黄酮的抗氧化活性进行研究,实验结果如下:采用乙醇回流提取法对枣叶中的黄酮类化合物的提取工艺进行单因素试验,通过正交法得到的最佳工艺条件为:乙醇浓度50%,料液比1:10,回流时间1.0h,提取温度70℃。在此条件下,得到的总黄酮的含量为14.3151mg/g。将得到的枣叶黄酮类化合物的粗提液进行大孔树脂的分离纯化,通过大孔树脂的静态实验,从7种大孔树脂中遴选出大孔树脂D101进行黄酮类化合物的分离纯化。通过大孔树脂的静态、动态吸附和解吸附实验确定了纯化枣叶总黄酮的最佳工艺:枣叶总黄酮的上样量为40mL,上样液的pH值为5,选择体积分数70%的乙醇进行洗脱,洗脱体积为200mL。考察高效液相色谱法分离枣叶总黄酮的色谱条件,最终选择流动相为乙腈-水。通过液相色谱-质谱法联用对枣叶中的黄酮类化合物进行单体分析,得到了7种化合物,通过质谱图分离,参考相关文献,基本可以确定五种黄酮类化合物,它们为:野黄芩苷、芦丁、枸橘苷、柚皮苷、橙皮苷。考察枣叶总黄酮的体外清除自由基的能力和斑马鱼体内抗氧化活性,实验结果表明枣叶总黄酮能够很好的清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子。通过还原力实验,发现枣叶总黄酮的还原力与相同浓度的Vc相比,相差不大,说明枣叶总黄酮具有较好的抗氧化活性能力。在斑马鱼体内抗氧化活性实验中,通过显微观察,结果表明,枣叶总黄酮能够部分恢复皮肤荧光斑马鱼上的荧光点,说明枣叶总黄酮的抗氧化活性较强,对自由基有很好的清楚作用。
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