本研究以金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)为活性成分,以玉米蛴螬为目标害虫,通过各种助剂的优化配伍,研制出金龟子绿僵菌的生物型种衣剂。用绿色荧光蛋白给金龟子绿僵菌标记,采用已研制的配方给玉米种子包衣,定期测定金龟子绿僵菌在玉米根际的定殖情况,评价了该种衣剂防治地下害虫的潜力。并通过玉米田间试验,证明了该剂型的实际应用效果。通过生物测定,比较了布氏白僵菌和金龟子绿僵菌的五个菌株对暗黑鳃金龟的毒力。在浓度为1×107孢子/ml时,Bbr06、Bbr17、Ma09、Ma20、Ma55的侵染率分别为13.33%、22.22%、42.22%、68.89%、95.56%,其中以Ma55最高。当浓度为1×107、1×108、1×109孢子/ml时,其LT50分别为10.93、9.12、7.65d。在种衣剂剂型研究中,以Ma55为试验菌株,通过溶剂油、成膜剂、抗氧化剂、植物生长调节剂与其分生孢子的长期相容性试验,得出最佳助剂。孢油比为0.2g /ml、0.1g /ml、0.05g /ml时,B油第90d的萌发率均显著高于其他溶剂油(P<0.05);且都显著高于对照组室温和25℃时的萌发率(P<0.05);同时,与4℃对照组萌发率差异不显著(P>0.05)。由此可以得出B油为最佳油剂油。成膜剂JX各项物理指标都是最优的,种子出苗率与对照组差异不显著(P>0.05),且成膜剂JX在三种浓度下(0.1%、0.5%、1%)萌发率均显著高于其他两种(P<0.05)。在三种不同的浓度下(0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml),TBHQ都表现出更为优异的清除自由基活性;在相容性试验中,当浓度为0.1mg/ml时,孢子萌发率显著高于其他两种(P<0.05)。在植物生长调节剂的试验中,在NAA的三种浓度下(1ppm、2ppm、3ppm),孢子萌发率显著高于6-BA(P<0.05)。从而得出最佳助剂为B溶剂油、JX、TBHQ、NAA。采用二次通用回归旋转设计的方法研究了成膜剂、抗氧化剂、植物生长调节剂的最佳配比。通过对比实验,结合各助剂的特性得出金龟子绿僵菌种衣剂的配方为:B油剂油,孢油比为0.1g/ml,成膜剂为0.05%的JX,抗氧化剂为0.1mg/ml的TBHQ,植物生长调节剂为2ppm的NAA。在研究金龟子绿僵菌在玉米根际的定殖试验中,利用草胺磷抗性基因bar为筛选标记,将绿色荧光蛋白基因(gfp)转入载体pbarGPE1,得到了组成性表达载体pGPE-GFP,并转入金龟子绿僵菌Ma55,获成功表达。用含有gfp基因的金龟子绿僵菌孢子粉配制种衣剂,并给玉米种子包衣。对玉米苗期根际定殖情况进行定期取样观测。结果表明,与非根际土壤相比,在根际土壤中被标记的绿僵菌的带菌量不仅最大,而且在播种后第10天数量达到最大,然后在第20～30d内数量即不再显著变动。相比之下,非根际土壤中的带菌量不仅极显著少于根际土壤,且随时间的延长明显降低;在表层土中的带菌量很低,而且也随时间的延长显著降低。这些证据表明,应用该种衣剂剂型,金龟子绿僵菌孢子在玉米根际有较高活力和定殖效果,从而为该生物型种衣剂防治地下害虫的利用潜力提供了依据。分别以三种包衣浓度(1:10、1:25、1:50)对玉米做了田间试验,在播种后第10天统计其出苗率。出当包衣比例为1:25、1:50时,出苗率与对照组差异不显著(P>0.05);在第30天时,统计防虫效果。当包衣比例为1:10、1:25时,虫害苗率均与对照组差异显著(P<0.05),而以1:25效果较好。这表明金龟子绿僵菌种衣剂对防治玉米地下害虫具有良好前景。