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目的糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)是糖尿病(Diabetes mellitus, DM)患者最严重的并发症之一,也是终末期肾病(End stage renal disease, ESRD)的最主要原因。目前DN的病因尚未完全阐明,新近研究证实免疫炎症损伤在DN发生发展过程中占有重要地位,巨噬细胞及其相关炎症因子可通过致炎作用导致肾损害。雷公藤多苷作为一种免疫抑制剂,具有强大的抗炎、抗免疫作用。本研究以链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)介导的2型糖尿病(Type2diabetes mellitus, T2DM)和肾病大鼠模型为研究对象,探讨雷公藤多苷对大鼠巨噬细胞及其白介素-12(Interleukin-12, IL-12)、信号转导与转录激活因子4(Signal transducers and activators of transcription4, STAT4)、γ-干扰素(Gamma interferon, IFN-γ)表达的影响及其可能机制。方法清洁级雄性SD大鼠136只,随机选取16只分为预防正常对照组(PNC组)、治疗正常对照组(TNC组),每组8只,饲以常规饲料；其余120只大鼠以高糖高脂饲料喂养4周联合小剂量STZ (30mg/kg)尾静脉注射建立T2DM模型,将成模大鼠随机分为预防模型对照组(PDM组)、预防雷公藤多苷低剂量组(PTL组,6mg/kg)、预防雷公藤多苷中剂量组(PTM组,12mg/kg)、预防雷公藤多苷高剂量组(PTH组,24mg/kg);治疗模型对照组(TDM组)、治疗雷公藤多苷低剂量组(TTL组,6mg/kg)、治疗雷公藤多苷中剂量组(TTM组,12mg/kg)、治疗雷公藤多苷高剂量组(TTH组,24mg/kg),每组15只。雷公藤多苷预防组于成模后即开始灌胃,灌胃4周后处死；雷公藤多苷治疗组于成模后第5周开始灌胃,第8周末处死；PNC、TNC组和PDM、TDM组以等量蒸馏水灌胃。实验过程中记录大鼠体重(BW)、血糖、24小时尿微量白蛋白(UMA)变化,STZ注射前内眦取血测血脂。实验结束时：①留取血标本用于肝肾功能、血脂、血常规测定以及ELISA法检测IL-12、IFN-γ;记录BW、肾脏重量(KW)；②留取肾组织标本,RT-PCR法检测CD68、IL-12、STAT4、IFN-γ的表达；Western Blotting法检测IL-12、STAT4、p-STAT4、IFN-γ的表达；免疫组化法检测CD68的表达。结果1.造模结果：高糖高脂喂养组大鼠在高糖高脂饲料喂养4周后基础血糖、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)较正常对照组明显升高；STZ注射后,‘糖尿病模型组大鼠血糖明显升高,出现多饮、多尿、多食、体重下降等症状,UMA自第4周起明显高于正常对照组。2.一般指标：①体重、血糖：与PNC、TNC组相比,雷公藤多苷预防组和治疗组血糖明显升高(P<0.05),体重明显下降(P<0.05)；②肝、肾功能：PTH组谷草转氨酶(AST)较PNC、PDM、雷公藤多苷预防给药组明显升高(P<0.05)；雷公藤多苷治疗组中AST无明显差异(P>0.05)；其余谷丙转氨酶(ALT)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)在各组间均无明显差异(P>0.05)。③血脂：PDM、TDM组大鼠TG、TC较PNC、TNC组明显升高(P<0.05)；雷公藤多苷预防组和治疗组给药后TG、TC较PDM、TDM组明显降低(P<0.05)；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)在各组间无明显差异(P>0.05)。④血常规：雷公藤多苷治疗组中三个给药组的淋巴细胞较TNC组明显降低(P<0.05)；雷公藤多苷预防组中淋巴细胞无明显差异(P>0.05)；其余白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白、单核细胞和中性粒细胞在各组间均无明显差异(P>0.05)。3.UMA和肾重指数(KW/BW):与PNC、TNC组相比,PDM、TDM组大鼠UMA、KW/BW明显升高(P<0.05)；与PDM组相比,雷公藤多苷预防组给药后UMA、KW/BW有不同程度降低,其中PTM组下降最明显(P<0.05),PTL组次之(P<0.05),PTH组降低不明显(P>0.05)；与TDM组相比,雷公藤多苷治疗组给药后UMA、KW/BW均明显降低(P<0.05),以TTM组下降最明显。4. ELISA:与PNC、TNC组相比,PDM、TDM组血清IL-12、IFN-γ水平均明显升高(P<0.05)；与PDM、TDM组相比,雷公藤多苷预防组和治疗组给药后IL-12、IFN-γ水平均明显降低(P<0.05),以PTM、TTM组下降最明显。5. RT-PCR:与PNC、TNC组相比,PDM、TDM组大鼠肾脏CD68、IL-12. STAT4、IFN-γ mRNA水平均明显升高(P<0.05)；与PDM、TDM组相比,雷公藤多苷预防组和治疗组给药后CD68、IL-12、STAT4、IFN-γ mRNA水平均明显降低(P<0.05),以PTM、TTM组下降最明显。6. Western Blotting:与PNC、TNC组相比,PDM、TDM组大鼠肾脏IL-12、p-STAT4/STAT4、IFN-γ蛋白水平均明显升高(P<0.05)；与PDM、TDM组相比,雷公藤多苷预防组和治疗组给药后IL-12、p-STAT4/STAT4、IFN-γ蛋白水平均明显降低(P<0.05),以PTM、TTM组下降最明显。7.免疫组化：PNC、TNC组大鼠肾小球及肾小管可见少量表达的CD68;与PNC、TNC组相比,PDM、TDM组大鼠肾小球系膜区及肾小管中CD68表达明显增加(P<0.05)；雷公藤多苷预防组和治疗组给药后CD68表达较PDM、TDM组明显下降(P<0.05),以PTM、TTM组下降最明显。结论1.成功制备T2DM和DN模型,高血糖、高血脂、24h尿蛋白特点符合人类T2DM和DN特征。2.DN大鼠肾脏CD68、IL-12、p-STAT4、IFN-γ以及血清中IL-12、IFN-γ的表达水平均较正常对照组明显增加,提示致炎作用参与了DN的发生发展。3.应用低剂量(6mg/kg)、中剂量(12mg/kg)雷公藤多苷早期预防和治疗DN,均可显著降低蛋白尿,以中剂量效果最明显。4.应用不同剂量雷公藤多苷早期预防和治疗DN,均可能通过抑制巨噬细胞浸润以及下调IL-12、p-STAT4、IFN-γ的表达减轻炎症损伤从而改善DN,以中剂量效果最明显。5.低、中剂量雷公藤多苷具有较高的安全性,而高剂量(24mg/kg)雷公藤多苷可能引起肝损害,临床应用雷公藤多苷要注意控制药量,密切观察副作用。