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大麻素受体1(cannabinoid receptor1,CNR1)和大麻素受体2(cannabinoid receptor2,CNR2)均属于G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptors, GPCRs)家族成员。二者存在于动物的内源性大麻素系统中,当CNRl和CNR2被内源性大麻素激活后,主要通过与G蛋白偶联调节第二信使水平,并参与机体多种生理和病理过程。CNR1和CNR2激活后可与Gi蛋白偶联,可使环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)水平下降。其中CNR1激活后,可使动物体重增加,能量消耗减少。而CNR2被激活后,可激发一系列免疫反应。目前,对于CNR1和CNR2的激动剂和拮抗剂在人类的肥胖、疾病治疗中研究较多,动物中的相关研究较少,猪和牛的相关报道几乎未见。因此,本研究构建猪的大麻素受体1(pCNRl),牛的大麻素受体1(cCNRl)和大麻素受体2(cCNR2)基因真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达,同时针对三个受体分别选择一种激动剂和反向激动剂进行初步的药理学特性研究,为进一步了解猪和牛的大麻素受体特性及建立高通量筛选模型奠定基础。主要研究结果如下：根据Genbank中pCNRl, cCNRl和cCNR2的标准序列分别设计3对含有限制性内切酶位点(HindⅢ和XbaⅠ)的特异性引物,以猪和牛的基因组DNA为模板,扩增pCNRl, cCNR1和cCNR2编码区序列,分别得到pCNRl基因编码区序列大小为1419bp,编码472个氨基酸；cCNRl基因编码区序列大小为1419bp,编码472个氨基酸；cCNR2基因编码区序列大小为1086bp,编码361个氨基酸。将双酶切的目的基因片段和pcDNA3.1(+)通过T4连接酶进行连接,酶切和测序鉴定正确的质粒加入Kozak序列(GAACAA)和myc标签,结果成功构建了pcDNA3.1(+)-myc/pCNR1, pcDNA3.1(+)-myc/cCNR1和pcDNA3.1(+)-myc/cCNR2真核表达载体。以脂质体法分别将构建好的真核表达载体pcDNA3.1(+)-myc/pCNRl, pcDNA3.1(+)-myc/cCNR1和pcDNA3.1(+)-myc/cCNR2瞬时转染至HEK293T细胞,用蛋白免疫印迹(Western blot)检(?)(?)pCNRl, cCNRl和cCNR2的表达情况,结果成功表达目的蛋白。以脂质体法分别将荧光素酶报告基因质粒pGL4与真核表达载体pcDNA3.1(+)-myc/pCNR1, pcDNA3.1(+)-myc/cCNR1和pcDNA3.1(+)-myc/cCNR2共转染至HEK293T细胞,24h后加入不同浓度的激动剂和反向激动剂(2-AG和PEA为激动剂,AM281和AM630为反向激动剂),结果得到,2-AG和PEA单独作用时可分别抑制表达pCNRl, cCNRl和cCNR2的细胞内cAMP信号通路,而同时加入一定浓度的Forskolin却可得到相反的结果,表达pCNR1和cCNR1的细胞内cAMP水平会随着2-AG浓度的增加而增加,但Forskolin和PEA共同作用于表达cCNR2的细胞却未得到同样的结果,另外,本试验发现,当2-AG浓度达到10-5M时,会使表达pCNR1和cCNR1的细胞内cAMP水平忽然升高；而AM281和AM630无论是单独作用还是与Forskolin共同作用,结果都是在一定浓度范围内随着AM281和AM630浓度的升高而不断激活表达pCNR1, cCNR1和cCNR2的细胞内cAMP信号通路。