类风湿性关节炎（RA）是一种以关节致残性病变为主的自身免疫性疾病。与其他类型关节炎的区别在于，RA受累关节的主要病理表现为炎性细胞浸润、持续性滑膜炎、血管翳形成、滑膜组织异常增生以及软骨和骨的进行性破坏等。RA发病早期T细胞依赖性自身免疫导致关节腔内发生炎性渗出，进入慢性期后非 T细胞依赖性滑膜过度增生、侵袭破坏关节软骨和软骨下骨是RA晚期关节软骨破坏的重要原因。因此，深入研究 RA关节软骨破坏相关的信号转导过程，探寻其中的重要环节和关键信号转导分子，对于更好地防治RA有着极其重要的意义。　　前期的实验研究发现，在RA滑膜成纤维样细胞中存在一种特殊的、具有受体酪氨酸蛋白激酶活性的盘状结构域受体 DDR2且呈高表达状态；它以胶原为配体，通过同源二聚化使其胞内区第471位酪氨酸残基发生磷酸化修饰，处于持续活化状态，促进MMP1和MMP13的大量分泌，参与RA关节软骨破坏；体外表达纯化的 DDR2受体胞外区蛋白可与DDR2竞争性结合 II型胶原，抑制 RA FLS分泌MMP1，在CIA大鼠模型中观察到可溶性的DDR2可改善关节软骨的破坏。因此，提出在RA滑膜组织增生侵袭破坏软骨的进程中可能存在这样一个恶性循环：在异常的自身免疫状态下，软骨脱落的 II型胶原激活滑膜成纤维样细胞中的 DDR2受体，从而诱导滑膜成纤维样细胞过表达MMPs；DDR2受体在胶原强大而持续的作用下持续活化，使得滑膜成纤维样细胞不断地分泌 MMPs，这些持续分泌的 MMPs对骨和软骨产生严重的破坏；然而，被破坏的软骨又可进一步释放大量的胶原物质，随即成为MMPs的诱导因素，如此反复，周而复始。　　然而从膜受体DDR2活化到胞内效应分子MMPs的过度分泌，其中详细的作用机制及关键信号转导分子尚不清楚。CYR61是利用Agilent Human1A基因表达谱芯片对II型胶原刺激前后RA滑膜成纤维样细胞进行差异分析获得的基因，为了深入探讨CYR61在DDR2-MMPs通路中扮演的角色及其对RA关节软骨破坏的作用，进行以下实验研究：　　首先，利用Real-time PCR、Western-blot以及免疫组化等实验技术系统分析DDR2、CYR61以及MMPs在RA滑膜组织中的表达水平和表达分布，评价CYR61在RA发生、发展的临床意义；其次，应用Real-time PCR和蛋白免疫印迹观察上调或者下调DDR2的活化水平对CYR61表达水平的影响并通过EMSA、双荧光素酶报告基因、Real-time PCR和蛋白免疫印迹等方法阐明DDR2调控CYR61表达的分子机制，从而揭示 II型胶原-DDR2-CYR61通路的存在；接着，以过表达腺病毒Ad-CYR61和CYR61 siRNA为研究工具，采用Real-time PCR和蛋白免疫印迹方法验证CYR61对下游效应分子MMPs的影响，同时，综合运用生物信息学、双荧光素酶报告系统、染色质免疫共沉淀以及凝胶迁移实验等实验方法，深入探讨CYR61调控MMPs表达的具体分子机制；然后，使用Transwell和细胞划痕实验检测关键分子CYR61对RA滑膜成纤维样细胞侵袭迁移功能的影响；最后，通过构建Wistar大鼠CIA模型，给予干涉腺病毒shCYR61局部治疗，阻断动物关节局部CYR61的表达，来评估腺病毒shCYR61对CIA大鼠关节软骨损伤的治疗效果。　　通过以上实验研究获得了下列结果：① Real-time PCR结果显示，RA患者滑膜组织中DDR2、CYR61以及MMP1、MMP9、MMP13的mRNA表达水平均高于OA患者滑膜组织，DDR2与CYR61 mRNA的表达水平呈正相关，CYR61与MMP1 mRNA的表达水平呈正相关。②蛋白免疫印迹结果同样显示，RA患者滑膜组织中DDR2、CYR61及MMP1的蛋白表达水平均显著高于OA患者滑膜组织。免疫组化结果显示，DDR2、MMP1均表达于滑膜衬里层，DDR2与MMP1在RA滑膜组织中的表达水平高于OA；CYR61则泛表达于多种组织中，RA滑膜及滑膜下结缔组织中CYR61的表达水平高于OA。③利用Real-time PCR和蛋白免疫印迹观察上调或者下调DDR2的活化水平对CYR61表达水平的影响，结果显示II型胶原刺激DDR2活化能够促进CYR61的表达，干涉DDR2抑制CYR61的mRNA和蛋白表达水平。④ EMSA和双荧光素酶报告基因结果显示II型胶原诱导DDR2活化可增强转录因子AP-1在CYR61启动子区域的结合活性，从而诱导CYR61转录活性升高，促进CYR61的表达。⑤ CYR61能够调控转录因子ETS1转录水平和蛋白水平的表达。⑥双荧光素酶报告基因、ChIP和EMSA实验结果显示，转录因子ETS1通过与MMP1基因转录起始位点上游-122~-102 bp启动子序列直接结合，增强MMP1的转录活性，促进MMP1的表达。⑦ Transwell和细胞划痕实验结果表明，CYR61能够促进FLS细胞侵袭迁移功能。⑧动物实验结果显示，干涉 CYR61的表达能够明显降低关节炎的发生率和关节炎指数评分，显著改善关节软组织肿胀程度；⑨ X射线和Micro-CT检查结果提示，干涉腺病毒shCYR61对CIA大鼠关节软骨破坏具有良好的治疗效果；⑩组织病理学检查结果发现阻断CYR61的表达能够减少炎性细胞的浸润。　　本研究中首次证实了CYR61作为DDR2-MMPs通路中的关键信号转导分子在介导DDR2过分泌MMPs及促进RA FLS细胞侵袭迁移和关节软骨损伤过程中发挥重要作用。该研究结果完善和补充了DDR2-MMPs通路中关键环节和关键信号转导分子，为进一步阐明 RA中晚期病变的发病机制及新的药物靶点的开发提供了新思路。