植原体诱导下抗枣疯病相关基因的差异表达研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:wyzwayjx
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枣(Ziziphus jujuba Mill.)为鼠李科(Rhamnaceae)枣属(Ziziphus Mill.)植物,是我国特有的宝贵种质资源和重要的特色果树。枣疯病由植原体引起,是枣树上最严重的毁灭性病害之一。利用现有的抗病种质资源,借助分子生物学手段和方法克隆抗病基因,开展分子辅助育种具有重要意义。本研究利用cDNA-AFLP技术,以感病品种‘赞皇大枣’为对照,进行了抗枣疯病品种‘星光’在植原体侵染后不同时期相关基因的差异表达分析。获得如下结果:1.获得了86条差异条带,其中26条为抗病相关条带,14条为感病相关条带,与植原体侵染相关的条带18条,感病品种特有条带24条,抗病品种特有条带4条。应用130对cDNA-AFLP引物对枣接种病原侵染前后的全部cDNA进行了分析和比对,获得20对能扩增出抗枣疯病品种不同时期与对照样品之间的差异表达量或者差异表达条带的AFLP引物,引物Eaa/Mgt扩增出的1条400bp差异表达片段,只出现在抗病品种病原侵染后的样品中。引物Ec/Maa扩增结果显示在250bp处有1条带与植原体侵染有关,非抗病相关也非感病相关。2.确定了‘星光’抗病机制诱导产生的不同时期。通过对嫁接侵染后55d到115d‘星光’体内产生的差异表达条带的数量进行分析,认为侵染后55d~75d为抗病机制的启动期,75d~115d是抗病机制的充分表达期,到115d以后进入抗病机制产生后的稳定期。3.初步确定了一条与枣疯病抗性相关的核酸序列,长度233bp。回收了4条差异片断,经过测序获得了其中3条差异片断的核酸序列,序列长度分别为399bp、233bp和240 bp。利用NCBI数据库,进行了Blast比对分析,其中一条233bp的片段与数据库中小麦条锈病诱导相关序列同源性达到了95%,与木薯胁迫抗性相关序列同源性达到了100%。初步确定该序列是植原体侵染后‘星光’体内产生的抗性相关片段。
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